طراحی و ساخت آدنوویروس های نوترکیب انکولیتیک به منظور درمان رده های سلولی سرطان معده: رویکرد مبتنی بر وایرال وکتور

ویروس درمانی انکولیتیک به عنوان راهکاری نویدبخش برای درمان سرطان شناخته می شود. ویروس های انکولیتیک مانند آدنوویروس ها قادرند در سلول های سرطانی تکثیر و آن ها را متلاشی کنند. آدنوویروس سروتیپ 5 ازطریق گیرنده کوکساکی - آدنوویروس به سطح سلول های میزبان متصل می شود. میزان بیان این گیرنده در سطح سلول های سرطانی بسیار متغییر است. هدف از این مطالعه، ساخت آدنوویروس انکولیتیک با ویژگی انتخابی بالا برای سلول های آدنوکارسینومای معده(AGS) بوده که قادرند در این سلول ها تکثیر و آن ها را تخریب کنند.  

در مطالعه تجربی حاضر، توالی اکتروتات در ناحیهHI-loop  فیبرآدنوویروس کلون گردید و بدین ترتیب وکتورهای نوترکیب  pAd5TATE(wt) و pAd5TATE (ΔE1,ΔE3) ساخته شدند. وکتور pAdZ-TATE (wt) با استفاده از سیستم کلونینگ pADZ سنتز شد. ذرات ویروسی نوترکیب Ad5TATE (wt) و Ad5TATE (ΔE1,ΔE3) سنتز شد و در سلول های HEK293 تکثیر شد. با استفاده از روش کلسیم فسفات، وکتورهای نوترکیب به رده سلولیHEK293  منتقل و بدین ترتیب ذرات ویروسی جدید تولید شد. رده سلولی AGS با ویروس Ad5 (wt) و Ad5TATE (wt) آلوده شدند و در زمان های مختلف، بروز اثرات تخریب سلولی در این سلول ها بررسی شد. با استفاده از آزمونMTT، میزان بقای سلولی در رده سلولی AGS تیمار شده با ویروس نوترکیب بررسی گردید.

اثرات تخریب سلولی (CPE) در کمتر از 18 ساعت شروع و 72 ساعت بعد از آلودگی کامل گردید. تیتر ویروس های نوترکیب با روش TCID50 برابر107 (برای Lµ  100 از محلول ویروسی) محاسبه شد. همچنین تیتر ویروس Ad5TATE(ΔE1,ΔE3) با روش TCID50 برابر TCID50/ml 107 بود. نتایج نشان داد، Ad5TATE(wt) در مقایسه با Ad5 (wt) ، توانایی آلوده سازی سلول های رده AGS را دارد. نتایج حاصل از آزمون MTT نشان داد، با افزایش غلظت ذرات ویروسی و زمان نگهداری، تعداد سلول های زنده AGS به طور قابل ملاحظه ای کاهش یافت.

یافته های این پژوهش نشان داد، ویروس نوترکیب Ad5TATE (wt) قادر است به صورت اختصاصی سلول های سرطانی رده سلولی آدنوکارسینوما معده (AGS) را آلوده و پس از تکثیر، آن ها را متلاشی کند. لذا می توان از ویروس Ad5TATE (wt) به عنوان عامل انکولیتیک علیه سلول های سرطانی رده سلولی آدنوکارسینوما معده (AGS) استفاده کرد.