خالص سازی آنتی لنفوسیت گلوبولین (ALG) انسانی

آنتی لنفوسیت گلوبولین (ALG) آنتی بادی پلی کلونال تولید شده در خرگوش است که علیه مارکرهای سطحی لنفوسیت های انسان بوجود می آید. ALG یکی از عوامل سرکوبگر ایمنی است که امروزه برای جلوگیری از وازنش اعضا پیوندی، درمان آنمی آپلاستیک و برخی از اختلالات خود ایمنی بکار می رود. آنتی لنفوسیت گلوبولین منجر به حذف لنفوسیت های انسان از گردش خون محیطی، تنظیم فعالیت های سیتوتوکسیک و بروز مرگ برنامه ریزی شده سلولی در آنها می گردد. هدف این مطالعه خالص سازی ALG با روش ساده، سریع و کم هزینه کروماتوگرافی تبادل یونی می باشد.
سرم غنی از ALG خرگوش ایمون با لنفوسیت های انسان به نسبت یک به یک با بافر فسفات نمکی با Ph=7.4 رقیق شد و با آمونیم سولفات اشباع در غلظت نهایی %50 رسوب داده شد. این رسوب پس از شستشوی مجدد با سولفات آمونیوم %50 در برابر بافر تریس فسفات با pH=8.1 دیالیز گردید و سپس به ستون تبادل یونی حاوی رزین دی اتیل آمینواتیل سفاروز برده شد. فراکسیون غنی از ALG ابتدا با استفاده از بافرتریس- فسفات با PH=8.1 و در نهایت با استفاده از بافر تریس- فسفات حاوی کلرید سدیم 50mM تخلیص و از ستون خارج گردید.
خلوص ALG با درصد خلوص بالا با روش SDS-PAGE و کارآیی آن با تستهای سازگاری نسجی به تایید رسید.
محصول تولیدی از نظر خلوص با ALG استاندارد تجاری قابل مقایسه بوده و گامی در جهت خود کفایی می باشد. رقت یک هشتادم ALG خالص سازی شده، لنفوسیتهای انسانی را در قالب انجام تستهای سازگاری نسجی به خوبی لیز می کند و این امر مبین کارآیی بالای محصول تولیدی است.