بررسی اثر فاکتور MAPKI) Mitogen Activated Protein Kinase Inhibitor) بر روی سلولهای بنیادی مزانشیمی در محیط کشت

سلولهای مزانشیمی بنیادی که قابل استخراج از مغز قرمز استخوان در حیوانات بالغ بوده و سالها پیش شناسایی شده اند، توانایی همانند سازی و تمایز به سلولهای متعددی نظیر سلولهای چربی، استخوانی، غضروفی و ماهیچه ای در شرایط خاص را دارا می باشند. این سلولها قابلیت چسبیدن، توانایی تشکیل کلونی و ایجاد سلولهای مشابه فیبروبلاستی را دارا هستند. به محض استخراج و کشت در محیط کشت آزمایشگاهی، این سلولها تمایل زیاد به تمایز یافتن داشته و وادار کردن آنها به همانند سازی جهت کاربرد در امور پزشکی و درمانی خیلی دشوار است. جهت وادار کردن این سلولها به همانند سازی در محیط کشت آزمایشگاهی و جلوگیری از تمایز ناخواسته آنها، تاثیر فاکتورهای مختلف برروی این سلولها مورد بررسی قرار می گیرد. در بررسی قبلی نشان داده ایم که حضور فاکتور (LIF) Leukemia Inhibitory Factor در محیط کشت اولیه باعث افزایش معنی دار در تعداد کلونی ها و اندازه آنها در محیط کشت ثانویه گردیده و این سلولها را در جهت تمایز به سلولهای استخوانی اولیه وادار می سازد. در این بررسی عکس العمل سلولها در محیط کشت حاوی (MAPKI) MAP Kinase Inhibitor مطالعه می شود. اثر فاکتور MAPKI بر روی سلولهای استخوانی اولیه وادار می سازد. در این بررسی عکس العمل سلولها در محیط کشت حاوی (MAPKI) MAP Kinase Inhibitor مطالعه می شود. اثر فاکتور MAPKI برروی سلولهای بنیادی جنینی در وادار کردن آنها به همانند سازی و جلوگیری از تمایز آنها مشخص بوده ولی تاثیر آن برروی سلولهای بنیادی مزانشیمی بررسی نشده است. در این مطالعه همچنین تاثیر دو فاکتور MAPKI و LIF بطور همزمان برروی همین سلولها بررسی گردید.
مغز قرمز استخوان از موشهای جوان 2 ماهه استخراج و در شرایط کاملا استریل در محیط کشت آلفا مینیموم اسنشیال مدیوم (aMEM) که حاوی فاکتور MAPKI با غلظت 25 میکرومول بود، کشت داده شد. تعداد کلونی های حاصل شده و نوع سلولهای تشکیل دهنده آنها با استفاده از رنگ آمیزی های متیلن بلو و الکالین فسفاتاز در زیر میکروسکوپ نوری بررسی و این سلولها با سلولهای کنترل که در همان محیط کشت در غیاب MAPKI رشد داده بودند، مقایسه گردیدند. تاثیر همزمان هر دو فاکتور MAPKI و LIF (با غلظت 500 واحد در میلی لیتر) بر روی سلولهای بنیادی مزانشیمی در تکثیر و همانند سازی آنها نیز مورد بررسی قرار گرفت.
حضور فاکتور MAPKI در محیط کشت اولیه، باعث کاهش چشمگیری در اندازه و تعداد کلونی های (Colony Forming Unite-Fibroblastic) CFU-F در مقایسه با سلولهای کشت داده شده در محیط کشت کنترل می گردد. در حضور این فاکتور تعداد کلونی های آلکالین فسفاتاز مثبت به نسبت مساوی کاهش یافته بود. اضافه نمودن فاکتور LIF به محیط کشت حاوی فاکتور MAPKI، تاثیر معنی داری در افزایش یا کاهش اندازه و تعداد کلونی های CFU-F و یا +CFU-ALP نداشته است.
فاکتور MAPKI باعث کاهش قابلیت تقسیم سلولهای مزانشیمی بنیادی می گردد. در حضور فاکتور LIF سلولها قابلیت همانند سازی و تکثیر بیشتر داشته و تمایل این سلولها در تمایز یافتن در جهت سلولهای استئوبلاست بیشتر است. با اضافه نمودن فاکتور MAPKI به محیط کشت، اثر فاکتور LIF بطور کامل خنثی شده و نشانگر این است که اثر این فاکتور UPSTREAM اثر فاکتور LIF است.