تشخیص Ralsonia solanacearum در غده های بذری سیب زمینی و خاک با استفاده از تکنیک PCR

باکتری Ralstonia solanacearum عامل بیماری پژمردگی باکتریایی یکی از عوامل مهم در کاهش محصول سیب زمینی در مناطق گرمسیر و نیمه گرمسیر می باشد. آلودگی نهفته این بیماری در غده های بذری ظاهرا سالم موجب گسترش سریع آن در خاکهای غیر آلوده می گردد. به همین خاطر کنترل موثر آن نیازمند دستیابی به روش های دقیق و حساس تشخیص آلودگی در خاک و غده می باشد. در این تحقیق کارایی تکنیک PCR برای تشخیص مولکولی باکتری R. solanacearum مورد بررسی قرار گرفت. این روش به تنهایی قادر به ردیابی جمعیت های پایین باکتری در حد 104CFU/ml باکتری در عصاره گیاه آلوده بود ولی پس از یک مرحله غنی سازی به مدت 48 ساعت توانست تا 10CFU/ml باکتری در غده و خاک آلوده را نیز شناسایی نماید. با استفاده از این روش حضور و گسترش باکتری R. solanacearum در غده و ساقه گیاهان آلوده در سه رقم هرتا، نیکولا و فیانا با استفاده از پرایمرهای 759 و 760 نشان داده شد. پرایمرهای مذکور بطور اختصاصی یک قطعه 281 جفت بازی از جدایه های R. solanacearum تولید نمودند. این روش با موفقیت وجود باکتری R. solanacearum را در غلظتهای 10 CFU/ml، 103، 105 و 107 در عصاره غنی شده خاک آلوده ردیابی نمود. عمل پیش غنی سازی علاوه بر افزایش جمعیت پاتوژن باعث خنثی نمودن اثرات ممانعت کننده ها و در نهایت موجب افزایش دقت تشخیص در تکنیک PCR گردید.