بررسی پارامترهای موثر در تلغیظ فرآورده ایمونو گلوبولین (Anti - Rh (D توسط سیستم اولترافیلتراسیون

ایمونوگلوبولین Anti-Rh (D) جهت پیشگیری از تولید آنتی بادی های Anti-Rh در افراد با Rh منفی که در معرض گلبولهای قرمز Rh مثبت قرارگرفته اند؛ استفاده می شود. فرایندهای تخلیص و آماده سازی این نوع فراورده تاثیر مستقیم بر طول عمر آن دارد. از طرفی با توجه به آن که محلولهای رقیق پروتئینی خارج شده از ستونهای کروماتوگرافی به علت اتصال به سطوح و تجزیه به زیر واحدهای متشکله، پایدار نیستند؛ لذا معمولا بعد از استخراج نیاز به تغلیظ دارند. هدف از این مطالعه تغلیظ فرآورده (Anti-Rh(D با استفاده از سیستم اولترافیلتراسیون وبررسی شرایط مناسب برای فرایند تغلیظ است.
جهت مطالعه پارامترهای مختلف موثر در تغلیظ ایمونوگلوبولین (Anti-Rh(Dتوسط روش اولترافیلتراسیون، مقدار ml 100 فرآورده خالص شده، به همراه گلایسین M3/0 و غلظت های مختلف سوکروز(mM90و60،30) به وسیله سیستم Minitan-S که فیلتر آن از نوع Polysulfon با cut off معادل30000 دالتون است؛ به مدت 50 دقیقه و تا حجم ml 27، تغلیظ شد. روش جریان آب تمیز جهت تعیین سرعت مناسب پمپ، روش برادفورد جهت تعین پروتئین تام موجود در محلولی که از فیلتر عبور کرده، روش SRID (Single Radial Immunodiffusion) جهت بررسی میزان IgG تام نمونه، قبل و بعد از تغلیظ، ژل فیلتراسیون برای بررسی میزان مولکولهای IgG تجمع یافته و شکسته شده و روش (Enzyme-Linked Antiglobulin Test) ELAT جهت تعیین میزانIgG اختصاصی(Anti-Rh (D مورد استفاده قرار گرفت.
نتایج نشان داد که تحت شرایط ذکر شده، تقریبا مقدار بسیار ناچیزی پروتئین از فیلتر عبور می کند که می توان از آن صرف نظر نمود. غلظت IgGتام نیز قبل و بعد از تغلیظ تقریبا یکسان است. در روش ژل فیلتراسیون وبا استفاده از ستون سفادکس G-200،میزان مولکول های تجمع یافته و شکسته شده در نمونه تغلیظ شدهIgG، به ترتیب 3/2 و 5/2 درصد و IgGمونومرنیز، 95 درصد به دست آمد. بررسی میزان Anti-Rh (D)نمونه های اولترافیلتر شده تحت فرمولاسیونهای مختلف توسط روش ELATنیز، بیانگر آن بود که در نمونه تغلیظ شده و بدون فرمولاسیون (Anti-Rh (D به میزان 2/8% کاهش یافته است. در فرمولاسیون هائی که حاوی M 3/0گلایسین و30، 60 و 90 mM سوکروز در بافر سدیم- پتاسیم فسفات mM25 pH 5/7 است به ترتیب 6/1%، 7/0% و 3/2% کاهش در میزان Anti-Rh (D) مشاهده شد.
با توجه به نتایج حاصل از این مطالعه، که سیستم اولترافیلتراسیون تحت شرایط ذکر شده برای تغلیظ (Anti-Rh(D روشی مناسب است. به منظور جلوگیری از دناتوراسیون پروتئین تحت فشار سیستم اولترافیلتراسیون در طی فرایند تغلیظ، مطلوب است که پایدارکننده هائی همچون گلایسین و سوکروز را قبل از عمل تغلیظ به فراورده اضافه نمود.