ساخت پلاسمید نوترکیب جدید حامل دو ژن خودکشی سلولی HSV-tk و Yeast-ed به منظور دستکاری ژنتیکی لیشمانیا

لیشمانیوز به گروهی از بیماری های انگلی ناشی از گونه های مختلف لیشمانیا اطلاق می شود که اشکال بالینی گوناگونی دارد. این انگل در انسان و حدود 100 گونه حیوان ایجاد بیماری می نماید و در بخش های وسیعی از جهان و از جمله ایران شایع است. یکی از زمینه های دستیابی به واکسنی موثر علیه لیشمانیا، دستکاری ژنتیکی این تک یاخته و استفاده از انگل مهندسی شده به عنوان واکسن می باشد. هدف از این تحقیق طراحی و ساخت کاست ژنی جدیدی است که به منظور وارد ساختن ژنهای خودکشی سلولی شامل HSV-tk و Yeast-cd به ژنوم لیشمانیا طراحی گردیده است.
در یک مطالعه آزمایشگاهی ابتدا دو قطعه ژن تیمیدین کیناز ویروس هرپس سیمپلکس (HSV-tk) و سیتوزین دآمیناز مخمر ساکارومایسس سرویزیه (Yeast-cd) به همراه ژن آلفا توبولین لیشمانیا (atub) با ترتیب tk-atub-cd در پلاسمید pBluscript کلون شدند. سپس مجموعه ژنی مذکور از پلاسمید pBluscript خارج گردیده و در پلاسمید pF4X1.4sat کلون گردید و به منظور تایید کانستراکت نهایی از هضم برش توسط آنزیم های محدود الاثر استفاده شد.
قطعات ژنی tk-atub-cd با موفقیت در پلاسمید pBluscript کلون گردیده و صحت کلونینگ مورد تایید قرار گرفت. سپس این مجموعه ژنی در پلاسمید pF4Z1.4sat درج شد و صحت حضور و ترتیب قرارگیری این ژنها اثبات گردید.
سیستم طراحی شده در این تحقیق می تواند دو ژن خودکشی سلولی را به درون ژنوم لیشمانیا منتقل کند و در تحقیقات آینده در زمینه دستیابی به واکسن زنده علیه لیشمانیا مورد استفاده قرار گیرد.