بیش بیان و تخلیص نانوبادی های نوترکیب و تهیه آنتی بادی ثانویه کونژوگه علیه آنها

قطعه متصل شونده به آنتی ژن از آنتی بادی های زنجیره سنگین شتری به صورت یک تک دومن(VHH)می باشند. ساختار کریستالی یک VHH خالص نشان داده است که این مولکول در حدود5/2 نانومتر قطر و کمتر از 4 نانومتر طول دارد. به همین علت به این مولکول نانوبادی گفته می شود. شباهت زیاد این مولکولها به VH انسانی موجب می شود که این مولکول کاربرد بالقوه در تشخیصهای ایمنی و نیز ایمنی درمانی داشته باشد. یکی از مواد مورد نیاز کلیدی در تولید و تعیین خصوصیات نانوبادی ونیز کاربرد نانوبادی ها در تشخیص، مولکول آنتی نانوبادی کونژوگه به HRP می باشد. نانوبادی های ویژه آنتی ژن بخوبی در E coli بیان می شوند. در این تحقیق بیان بالا و تخلیص چند نانوبادی ویژه تومورمارکرها گزارش شده است.به منظور بیان بالا، ژنهای نانوبادی در وکتور pSJF9 ساب کلون شدند، که در نتیجه قطعه نانوبادی به صورت ادغام شده با چند دنباله نشانگر در باکتری E coliنوعTG1 بیان می شود. نانوبادی های بیان شده با استفاده از ستون کروماتوگرافی تمایلی نیکل تخلیص شدند. در اینجا تهیه، تخلیص و تعیین خصوصیات آنتی بادی علیه نانوبادی ها که به صورت متصل به HRPمیباشد، توضیح داده شده است. آنتی بادی کونژوگه تولید شده قابل استفاده در سیستمهای تشخیص نانوبادی است. آنالیز با SDS-PAGE و وسترن بلات نشان می دهد که نانوبادی های تخلیص شده خالص و بدون شکستگی می باشد. بعلت استفاده از روش های خاص بیوشیمی آنتی بادی کونژوگه به HRP تولید شده در این تحقیق، حساسیت و ویژگی مناسبی دارد. بحث: با توجه به آزمونهای انجام شده مولکول حاصل قابلیت تشخیص نانوبادی ها را در انواع روش های تشخیصی با دقت و حساسیت بالا دارد.