کاربرد پادتنهای پلی کلونال در اندازه گیری آبسیزیک اسید در جلبک سبز تک یاخته ای دونالیه لا سالینا Dunaliella salina

بدنبال مشخص شدن اهمیت اندازه گیری فیتوهورمون آبسیزیک اسید (ABA) در جلبک سبز تک یاخته ای دونا لیه لا و بررسی میزان حساسیت درجه اطمینان و تکرارپذیری روش های مختلف، روش آزمون ایمنی آنزیمی (الایزا) از نوع رقابتی غیرمستقیم انتخاب شد. بعلت هاپتن بودن ملکولABA، ازآلبومین سرم گاوی (BSA) بعنوان پروتئین حامل در آماده سازی ایمن ساز مناسب استفاده شد. پس از اتصال ABA به BSA و ارزیابی فرآیند همیوغی، مراحل ایمن سازی درخرگوش انجام شد. پس ازخون گیری از خرگوش ایمن شده، ایمونو گلوبولین ها از سایرپروتئین ها و اجزای سرم جدا شدند. در الیزای رقابتی، ابتدا همیوغ BSA-ABA، برسطح پلیت الایزا تثبیت شد. با رقابت پادگن آزاد و پادگن پوشش داده شده، در اتصال به پادتن و با استفاده از پادتن ثانوی نشاندار شده با آنزیم پراکسیداز HRP، نتیجه واکنش آنزیمی پس از اضافه نمودن گهرمایه (TMB)، بطریق رنگ سنجی تعیین شد. منحنی استاندارد براساس جذب نوری درطول موج450 نانومتر دربرابر غلظت ABA آزاد رسم، و غلظتABA در نمونه های جلبکی خالص شده تعیین شد. جذب نوری غلظت های ABA آزاد در محدوده 100 پیکو گرم تا 1000 نانو گرم خطی بوده وضریب تغییرات (CV%) درارزیابی های درون و بین آزمونی منحنی های استاندارد، بیانگر مقادیر قابل قبول (کمتر از 10) می باشد. همچنین درصد بازیافت ABA (%RC) درآزمون الیزا در حد مطلوب (109%) ارزیابی شد. آزمون توازی (پاراللیزم) دررقت های مختلفی از یک نمونه جلبکی استخراج شده، انجام شد. داده های دال بر هماهنگی منحنی حاصل از نمونه با منحنی استاندارد بود. ثابت تمایل (Ka) پادتن مورد نظر 109 × 32/0 لیتر بر مول تعیین گردید. جمع بندی نتایج حاصل از موارد فوق نشان دهنده صحت آزمون الیزا دراین تحقیق می باشد. در مرحله بعد مقادیر ABA در کلیه نمونه های شاهد (بدون تنش) ونمونه های تحت تنش شوری اندازه گیری شد. نتایج نشان داد که ABA در جلبک دونا لیه لا سالینا بعنوان یک ترکیب داخلی و نیزیک هورمون تنش وجود دارد. در یاخته های شاهد غلظت ABA درون یاخته پایین بوده و تولید آن شش ساعت پس از شوک شوری افزایش می یابد. همچنین محتوای ABA درون یاخته ای در محیط 5/3 مولار نمک همواره بیشتر از محیط 5/1 مولار نمک می باشد.