طراحی و به کارگیری روش RT-PCR ELISA Multiplex برای تشخیص عفونت همزمان HCV و HIV-1

علیرغم غربالگری خون های اهدایی با روش های حساس مبتنی بر شناسایی آنتی بادی، همچنان خطر انتقال عفونت های ویروسی وجود دارد. بنابراین طراحی روش های حساس مبتنی بر شناسایی اسید نوکلئیک مورد توجه قرار گرفته است. هدف از این تحقیق طراحی روشی حساس تر در مرحله شناسایی نسبت به روش های معمول و همچنین تشخیص همزمان عفونت های ویروس نقص ایمنی اکتسابی تیپ یک و ویروس هپاتیت C در یک نمونه است.
پس از طراحی آغازگرها و پروب های اختصاصی دو ویروس و بهینه سازی روش واکنش زنجیره ای چندگانه، مرحله نشاندار کردن محصول با استفاده ازنوکلئوتیدهای متصل به دیگوگسی ژنین انجام شد. محصول به دست آمده ابتدا به دو قسمت مجزا تقسیم و پس از واسرشت شدن در شرایط قلیایی با پروب اختصاصی مجاور شد. پروب های حاوی بیوتین انتهایی پس از اضافه شدن به پلیت پوشش یافته با استرپت آویدین متصل شدند. پس از شستشو، آنتی بادی ضد دیگوگسی ژنین متصل به آنزیم آلکالن فسفاتاز به چاهک ها اضافه شد. در مرحله نهایی شستشو انجام و سوبسترا اضافه شد. با استفاده از روش رنگ سنجی نمونه های مثبت و منفی از نظر عفونت قابل شناسایی هستند.
35 نمونه با روش طراحی شده مورد آزمایش قرار گرفتند، که شامل 27 نمونه مثبت و 8 نمونه منفی تایید شده و 4 نمونه پانل استاندارد بودند. هیچ گونه نتیجه مثبت یا منفی کاذب مشاهده نشد.
روش طراحی شده دارای حساسیت و اختصاصیت قابل قبولی برای تشخیص عفونت ویروس نقص ایمنی اکتسابی تیپ یک و ویروس هپاتیت C در دوره پنجره می باشد به علاوه امکان کمی کردن روش وجود دارد، که در کنترل بیمار و پایش درمان مفید است. همچنین در کنار حساسیت بسیار بالا هزینه و زمان کمتری برای انجام آزمون نیاز است.