مطالعه تولید آنزیم کیتیناز در قارچ تریکودرما

در طول کشت گیاهان زراعی کاهش محصول ناشی از حمله قارچهای بیماریزا به گیاهان همواره بعنوان مهمترین عامل زیانهای اقتصادی محسوب میشود. قارچ تریکودرما، بدلیل ترشح بعضی از انواع آنزیمهای کیتینازی، بعنوان عاملی قوی در کنترل بیولوژیک بیماری های قارچی مورد استفاده قرار می گیرد.
در این تحقیق، شرایط بهینه جهت تولید آنزیم کیتیناز در جدایه های مختلف قارچ تریکودرما مورد مطالعه قرار گرفت. شرایط بهینه بدست آمده عبارتند از، 5=pH، 48 ساعت کشت در دمای 25 درجه سانتی گراد و هوادهی مناسب. پس از بهینه سازی شرایط تولید آنزیم کیتیناز در سه جدایه انتخابی قارچ تریکودرما، فعالیت آنزیم کیتینازی در 30 جدایه این قارچ در شرایط بهینه بدست آمده بررسی و جدایه Trichoderma harzianum8 با فعالیت U/ml 97 و فعالیت ویژه U/mg 35 بعنوان فعال ترین و جدایه Trichoderma sp. T.26 با فعالیت U/ml 44 و فعالیت ویژه U/mg 5 بعنوان ضعیف ترین جدایه انتخاب شدند. برای بررسی بیان ژنهای اندوکیتیناز chit31، chit33 و chit42 در جدایه Trichoderma harzianum8، که فعال ترین جدایه از نظر تولید آنزیم کیتیناز میباشد، الگوی SDS-PAGE در محیط های حاوی منابع کربنی متفاوت مقایسه شد و محل تقریبی باندهای سه اندوکیتیناز تعیین گردید. ضمنا، سه جفت آغازگر اختصاصی بر اساس توالی های موجود از این ژنها در NCBI طراحی شد و پس از انجام PCR اختصاصی، محصولات PCR توسط هضم با آنزیمهای Restriction Endonuclease تایید شد. بررسی نتایج بدست آمده از این بخش، حضور هر سه ژن اندوکیتیناز را در این جدایه قارچی تایید می کند. بدین ترتیب، با توجه به مطالعات انجام شده بر روی جدایهT. harzianum8، می توان از این جدایه در مطالعات مربوط به کنترل بیولوژیک بیماری های قارچی استفاده نمود.