تولید نوترکیب یک پروتئین اختصاصی بیضه موش (mTEX101) به منظور تولید آنتی بادی

mTEX101، یک GPI-anchored پروتئین kD38 است که تنها در بیضه موش بیان می شود. عملکرد و ساختار mTEX101 دقیقا شناخته نشده است؛ اما به نظر می رسد در مسیر انتقال سیگنال به داخل سلول ایفای نقش می کند. ساخت آنتی بادی بر علیه پروتئین های اختصاصی سلول های ژرمینال بیضه جهت مطالعه فرآیند اسپرماتوژنز و باروری و بررسی نقش احتمالی این پروتئینها در سرطان به عنوان «Cancer Testis Antigens» از ارزش فوق العاده ای برخوردار است. ابتدا به روش RT-PCR کل RNA استخراج شده از بیضه سه موش بالغ تبدیل به cDNA شد. سپس با استفاده از پرایمرهای اختصاصی، ناحیه ORF ژن mTEX101 در بیضه موش تکثیر یافته و باند حاصله جهت TA Cloning در داخل پلاسمید pGEM-T Easy به کار رفت. پس از بررسی و تایید کلون های بدست آمده، قطعه کلون شده به یک وکتور بیانی، pET-28a() انتقال داده شد. در مرحله بعد، پروتئین نوترکیب mTEX101 در باکتری BL 21 (DE3) E. coli تولید گردید.
پروتئین نوترکیب حاصل با وزن مولکولی kD27 با القا IPTG در باکتری ترانسفورم شده با پلاسمید pET-28a ()/mTEX101 تولید و حضور آن در تست وسترن بلات توسط آنتی بادی ضد پپتید mTEX101نشان داده شد.
با تولید پروتئین نوترکیب mTEX101در این مطالعه، امکان تخلیص مطالعه، ساختار مولکولی این پروتئین و به کارگیری آن جهت تولید آنتی بادی میسر گردید.