شناسایی سرکر اورنیتوبیلارزیا ترکستانیکم) ترماتودا) در حلزون لیمنه آگدروزیانا بوسیله Nested-PCR

ترماتودهای خانواده شیستوزوماتیده در عروق خونی انسان وحیوانات زندگی می کنند. انگل ارنیتوبیلارزیا ترکستانیکم یکی از کرمهای خانواده شیستوزوماتیده است که برخی ازحیوانات پستاندار را آلوده می کند. با توجه به اینکه اولا محل زندگی میزبانهای واسط گونه های مختلف شیستوزوما در آب های شیرین است و ثانیا از لحاظ شکل ظاهری، سرکر آنها شبیه یکدیگر می باشند، روش های تشخیصی مطمئن برای شناسایی و تفریق آنها از یکدیگر مورد نیاز می باشد. در این مطالعه یک روش PCR برای تشخیص انگل در حیوانات آلوده تهیه گردیده است. پرایمرهای اختصاصی بر مبنای سکانس منتشر شده این کرم طراحی شده است. ابتدا DNA انگل استخراج و سپس آزمایش PCR بهینه سازی گردید و قطعه ای به طول 724 جفت باز از کرم بالغ تکثیر شد. محصول PCR ابتدا در وکتور pTZ57R/T کلون و سپس تعیین توالی گردید و بدین ترتیب اختصاصی بودن آزمایش مورد تائید قرار گرفت. از تمام بافت های حلزون برای استخراج DNA انگل نیز استفاده شد. برای این منظور از روش Nested –PCR بکمک یک جفت پرایمر استفاده گردید. در این آزمایش قطعه ای بطول 449 جفت باز تکثیر شد و وجود یک حلزون آلوده در مجموعه ای از حلزون های غیرآلوده تشخیص داده شد. توالی به دست آمده به کمک برنامه بلاست نشان داد که این توالی دارای 682 جفت باز در محصول PCR میباشد. این اطلاعات با شماره AY862391 در بانک ژن قابل دسترسی است. نتایج این مطالعه نشان داد که در کنار سایر روش های آزمایشگاهی می توان از PCR و Nested -PCR به عنوان روش های تشخیصی مناسب جهت شناسایی سرکر ارنیتوبیلارزیا ترکستانیکم در نمونه های کلینیکی بهره جست.