جداسازی، کلونینگ وتعیین توالی ژن همآگلوتینین آنفلوآنزای A(H1N1) به منظور تهیه بانک ژن همآگلوتینین

آنفلوآنزا بیماری مسری عفونت دستگاه تنفسی است که در فصل های سرد سال شیوع پیدا می کند. شیوع ویروس جدید آنفلوآنزا A(H1N1) در سال 2009 که جمعیت کثیری از مردم جهان را درگیر کرد، مرگ و میر قابل توجهی در پی‎داشت. مولکول همآگلوتینین که اصلی‎ترین گلیکوپروتئین سطحی ویروس آنفلوآنزا است، یکی از ارکان مهم در تهیه کیت‎های تشخیصی و واکسن‎های موثر بر علیه این بیماری است. لذا تهیه بانک ژن سویه های شایع به منظور دسترسی سریع به مقدار انبوه این مولکول بسیار ضروری می‎باشد.
مواد و روش‎ها: این مطالعه از نوع پژوهشی- کاربردی می باشد. اولین قدم برای تهیه چنین بانکی، جداسازی ژن کامل همآگلوتینین و زیر واحدهای آن با استفاده از پرایمرهای اختصاصی وکلونینگ آنها در ناقلهای مناسب است. در این راستا ابتدا با استفاده از ژنوم ویروس استاندارد (A/NewCaledonia/20/99(H1N1)) کشت داده شده در سلول MDCK، ژن کد کننده همآگلوتینین به روش RT-PCR تکثیر و در ناقل مناسب کلون گردید.
یافته ها: جداسازی و کلونینگ ژن همآگلوتینین با روش PCR، هضم آنزیمی و تعیین ترادف نوکلئوتیدی تایید گردید. با استفاده از پرایمرهای ویژه کلونینگ، سازه های مختلف واجد ژن همآگلوتینین مورد نظر به منظور بیان ژن در سلول حشره و باکتری اشریشیا کلی، تهیه گردید.
نتایج به دست آمده نشان دهنده تطابق کامل قطعات ژنی استخراج شده با همآگلوتینین ویروس آنفلوآنزای 20/99(H1N1) A/New Caledonia است که استفاده ازاین منبع ژنی، اهداف خاص از قبیل کلون کردن در وکتورهای بیانی مختلف یوکاریوتی و پروکاریوتی را امکان پذیر می‎سازد.