طراحی واکنش زنجیرهای پلیمراز برای تشخیص مولکولی سالمونلا تیفی

سالمونلا انتریکا سروتایپ تیفی، باکتری مولد بیماری تب تیفوئید میباشد که سالانه بیش از 16 میلیون نفر در جهان به آن مبتلا میشوند و حدود 600 هزار نفر نیز در اثر آن می میرند. روش های کلاسیک تشخیص این بیماری اغلب وقتگیر میباشند و از حساسیت کافی برخوردار نیستند. هدف این مطالعه، ارائهی نوعی روش مولکولی واکنش زنجیرهای پلیمراز (PCR: Polymerase Chain Reaction) برای تشخیص سریع و انجام اقدامهای درمانی- بهداشتی مناسب و به موقع است.

در این مقاله تحقیقاتی ژن اختصاصی viaB مربوط به باکتری سالمونلا تیفی، هدفگذاری و از نرم افزار Generunner، برای طراحی پرایمرهای اختصاصی استفاده شد. واکنش PCR ژن فوق با استفاده از ژنوم باکتری استاندارد (PTCC 1609) انجام و ویژگی روش نیز با استفاده از ژنوم انواعی از نمونه های کنترل منفی تعیین گردید. به منظور ساخت کنترل مثبت، تعیین حساسیت و حد تشخیص، کلونینگ محصولات PCR در وکتور پلاسمیدی pTZ57R/T انجام گرفت.

الکتروفورز محصولات PCR، باندی به طول 441 جفتباز را برای ژن viaB نشان داد. نمونه های کنترل منفی مورد استفاده هیچ باندی ایجاد نکردند. کلونینگ محصولات PCR در وکتور pTZ57R/T با استفاده از PCR، هضم آنزیمی و تعیین ترادف تایید گردید.

پرایمرهای طراحی شده برای ژن viaB در این روش میتواند با حساسیتی حدود 19 کپی از ژنوم برای شناسایی این ارگانیسم بهکار رود و با ردیابی سریع و دقیق باکتری، از ایجاد عوارض پایدار و ناخواسته جلوگیری نماید.