تاثیر دما بر جنین زایی میکروسپور و باززایی گیاهان دابلد هاپلوئید در سه هیبرید کلزا (Brassica napus L.)

در این پژوهش، مراحل مختلف کشت میکروسپور (اعم از جنین زایی و باززایی) جهت تولید گیاهان دابلد هاپلوئید کلزا (Brassica napus L.) مورد بررسی قرار گرفت. هیبریدهای RGS003 ARC5، Hyola 401 و Hyola 420 به عنوان مواد گیاهی مورد استفاده قرار گرفتند. میکروسپورها در مرحله تکوینی انتهای تک سلولی تا ابتدای دو سلولی از غنچه هایی به طول 5/2 تا 5/3 میلی متر جدا شدند و در محیط کشت NLN-13 حاوی 13 درصد ساکارز کشت شدند و سپس تحت تنش های حرارتی C ° 37 به مدت 8 ساعت، C ° 35 به مدت18 ساعت، C ° 32 به مدت 72 ساعت و C ° 30 به مدت10 و14روز قرار گرفتند. هیبریدهای مورد استفاده تنها در 30 درجه سانتی گراد به مدت 10 و 14 روز تولید جنین رویشی کردند، هر چند تیمار ° C 30 به مدت 14 روز جنین زایی و باززایی بهتری نشان داد. بهترین روش برای غلبه بر جنین زایی ثانویه، انتقال جنین های لپه ای شکل به محیط B5 حاوی اسید جیبرلیک (mgl-1 01/0) و نگهداری در دمای 4 درجه سانتی گراد و تاریکی به مدت10 روز و سپس انتقال به روشنایی و دمای 25 درجه سانتی گراد تعیین شد. بعد از رشد، جنین ها به محیط B5 بدون اسید جیبرلیک جهت باززایی انتقال یافتند. گیاهان هاپلوئید به منظور افزایش سطح پلوئیدی با محلول کلشیسین (34/0 درصد) به مدت 5/1 ساعت تیمار شدند. گیاهان دابلد هاپلوئید از هر سه ژنوتیپ مورد بررسی، تولید بذر کردند.