همسانه سازی، بررسی بیوانفورماتیکی و بیان ژن زیر واحد اصلی فاکتور کلونیزاسیون I اشرشیاکولی انتروتوکسیژنیک (ETEC

اشرشیاکولی انتروتوکسیژنیک (ETEC) عامل اصلی اسهال کودکان در کشورهای در حال توسعه و مسافران به این مناطق می باشد. از طریق ساختارهای سطحی به نام فاکتورهای کلونیزاسیون به سلول های میزبان متصل می شود. اشرشیاکولی انتروتوکسیژنیک در بسیاری از مناطق شیوع فاکتور کلونیزاسیون نوع یک (CFA/I) از سایر فاکتورهای کلونیزاسیون بیشتر می باشد و این ترکیب به عنوان ترکیب کلیدی در تولید واکسن محسوب می گردد. مولکول کد کننده زیر واحد اصلی آنتی ژن فاکتور کلونیزاسیون (CfaB) به عنوان زیر واحد اصلی این فیمبریه کاندیدای مناسبی برای واکسن می باشد. این مطالعه با هدف همسانه سازی ژن CfaB و بررسی تولید پروتئین نوترکیب انجام شد.

در این مطالعه توصیفی آزمایشگاهی اطلاعات مربوط به ژن فاکتور کلونیزاسیون CfaB از بانک ژن استخراج شد و پرایمرهای مناسب آن طراحی شدند. با استفاده از واکنش PCR، ژن مورد نظر تکثیر و سپس درون ناقل همسانه سازی (pTZ57R/T) و سپس در ناقل بیانی (pET28a(+)) همسانه سازی شد و بیان ژن CfaB مورد ارزیابی قرار گرفت.

صحت همسانه سازی با استفاده از واکنش هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید شد. بیان این توالی در شرایط مختلف مانند دما، میزبان و محیط کشت های مختلف بررسی گردید اما توالی طبیعی در pET 28a بیان نداشت.

در طول توالی ژن کد کننده زیر واحد اصلی آنتی ژن فاکتور کلونیزاسیون کدون های نادر پشت سرهم وجود دارد که باعث کاهش بیان این پروتئین می شود.