کلون، بیان و تخلیص مایکولیل ترانسفراز C مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در میزبان پروکاریوتی

کمپلکس آنتی ژن 85 مایکوباکتریوم توبرکلوزیس شامل سه پروتئین ترشحی است که خاصیت ایمنی زایی دارند. این پروتئین ها کاندیداهای مهمی در طراحی واکسن سل هستند. برای استفاده از این پروتئین ها به عنوان واکسن های زیرواحدی یا به عنوان یادآور برای BCG نوترکیب یا واکسن های DNA، تولید آنتی ژن های پروتئینی به شکل نوترکیب الزامی است. پروتئین های مایکوباکتریوم که در دیواره هستند نسبتا غیرقطبی است و تولید آن ها به شکل نوترکیب در سویه بیانی اشریشیا کلی با پروتئین های دیگر متفاوت است. هدف از این مطالعه تولید و تخلیص آنتی ژن نوترکیب 85C به عنوان یک ایمنوژن است.
آنتی ژن 85C در حامل پلاسمیدی pJET1.2 و در نهایت در pET32a(+) کلون و در هر دو پلاسمید تعیین توالی شد. القای تولید پروتئین با IPTG صورت گرفت و تخلیص با حل کردن اجسام توده ای داخل سلولی در اوره، جذب با رزین نیکل، حذف اوره با شیب کاهشی اوره در محلول های شستشو و در نهایت جمع آوری پروتئین نوترکیب به شکل محلول انجام شد. تایید آنتی ژنیک پروتئین نوترکیب با وسترن بلات و توسط آنتی بادی ضد پلی هیستیدین، آنتی سرم پلی کلونال خرگوشی ضد مایکوباکتریوم توبرکولوزیس و سرم بیمار سلی بستری انجام شد.
ژن آنتی ژن 85C با موفقیت کلون و با تعیین توالی تایید شد. آنتی ژن 85C در میزبان اشریشیا کلی بیان و تخلیص شد.
نتایج وسترن بلات به موازات نتایج تعیین توالی نشان دهنده درستی تولید پروتئین آنتی ژن 85C نوترکیب و حفظ نسبی ساختار اپی توپی آن است.