تاثیر اسکافولد نانوفایبر PLLA بر تکثیر سلول های بنیادی اسپرماتوگونی منجمد- ذوب شده موش نابالغ

بررسی تاثیر اسکافولد نانوفایبر PLLA بر تکثیر سلول های بنیادی اسپرماتوگونی منجمد - ذوب شده موش نابالغ

سلول های اسپرماتوگونی از موش 6-3 روزه با دو مرحله هضم آنزیمی جدا و با روش حذف تمایزی خالص سازی گردید. سلول های جدا شده در چهار گروه کشت داده شدند: 1-کشت ساده سلول های اسپرماتوگونی تازه، 2- سلول های اسپرماتوگونی تازه روی نانوفایبر PLLA، 3- کشت ساده سلول های اسپرماتوگونی منجمد- ذوب شده، 4- سلول های اسپرماتوگونی منجمد- ذوب شده روی نانوفایبر PLLA. سلول ها در محیط کشت DMEM حاوی5 درصد FCSو 10 نانوگرم بر میلی لیترGDNF به مدت سه هفته کشت شدند. طی مدت کشت تعداد و قطر کلونی ها بررسی شد. پس از سه هفته، حضور سلول های اسپرماتوگونی در کلونی ها به وسیله RT-PCR برای ژن های PLZF، Oct4، GFRα-1، VASA، ITGA6، ITGB1ارزیابی و به طور نیمه کمی نیز بررسی شد. معنی داری میان گروه ها به کمک آزمون های آماریRepeated measures و ANOVA تعیین شد.

یافته ها نشان داد که درصد حیات سلول ها در گروه سلول تازه(گروه کنترل 1 و آزمون 1) 2/2±25/ 89 و در گروه سلول منجمد 56/3±63 بود که درصد حیات این سلول ها نسبت به گروه سلول تازه به طور معنی داری کاهش نشان داد ((p≤0/001. تعداد کلونی های حاصل از کشت سلول های اسپرماتوگونی روی نانوفایبر PLLA(گروه آزمون 1 و آزمون 2) در مقایسه با گروه های کنترل(گروه کنترل 1 و کنترل 2) به طور معنی داری افزایش یافت (p≤0/001). همچنین قطر کلونی ها در گروه آزمون1 (کشت سلول های تازه بدون نانوفایبر) نسبت به گروه کنترل1 (کشت سلول های تازه بدون نانوفایبر) اختلاف معنی داری نداشت ولی در گروه آزمون2 (کشت سلول های منجمد- ذوب شده روی نانوفایبر) نسبت به گروه کنترل 2 (کشت سلول های تازه روی نانوفایبر) کاهش معنی داری داشت p≤0.01)). در پایان کشت تمامی ژن های اختصاصی اسپرماتوگونی بیان شدند ولی کاهش معنی داری در بیان نسبی برخی ژن های اسپرماتوگونی در کشت سلول های منجمد- ذوب شده روی نانوفایبر دیده شد.

نانوفایبرPLLA باعث افزایش تکثیر سلول های بنیادی اسپرماتوگونی تازه و منجمد-ذوب شده در محیط کشت می شود ولی بر میزان نسبی بیان ژن های اسپرماتوگونی اثری ندارد.