تهیه و تخلیص آنتی بادی های پلی کلونال علیه آنتی ژن های مایکوباکتریوم آویوم پاراتوبرکلوزیس در خرگوش

بیماری یون یک آنتریت گرانولوماتوزی مزمن در نشخوار کنندگان است و تهدید کننده سلامتی دام ها در سراسر دنیا است. در سال های اخیر محققین آنتی ژن های مایکوباکتریوم آویوم پاراتوبرکلوزیس را برای شناسایی یک تست تشخیصی حساس مورد توجه قرار داده اند؛ لذا شناسایی آنتی بادی ها علیه آنتی ژن های پیکره MAP، جهت تشخیص یا تولید واکسن موثر می باشد. این مطالعه با هدف تهیه و تخلیص آنتی بادی ها علیه آنتی ژن های مایکوباکتریوم پاراتوبرکلوزیس اجرا شد.
ایمونیزاسیون خرگوش طی برنامه زمان بندی مشخص به وسیله آنتی ژن های MAP و ادجوانت فروند انجام گردید. خون گیری از خرگوش و جداسازی سرم صورت پذیرفت. ایمونوگلوبولین های سرم به روش ترسیب با آمونیوم سولفات 35% از سرم جدا شد و تخلیص IgG با کروماتوگرافی تعویض یونی (DEAE-celloluse) انجام گرفت. در نهایت برای بررسی واکنش آنتی ژن ها با آنتی بادی های تخلیص یافته تست سرولوژیک بکارگرفته شد.
یک پیک با استفاده از کروماتوگرافی IgG بدست آمد و SDS-PAGE، فراکسیون های حاصل از یک باند منفرد را برای IgG نشان داد. IgG حاصل در تست سرولوژیک استفاده شد و خطوط رسوبی حاصله تا رقت 16/1 تاییدی بر پاسخ مثبت آنتی بادی های پلی کلونال به آنتی ژن ها بود.
در این مطالعه القای پاسخ ایمنی در خرگوش برای تولید آنتی بادی پلی ‎کلونال با تیتر بالا انجام گردید و آنتی بادی های تخلیص شده در پاسخ به آنتی ژن های MAP واکنش مثبت نشان دادند. آنتی بادی های پلی کلونال نسبتا ارزان و در مقادیر بالا قابل تولید می باشند و قادر به اتصال به جایگاه های بیشتری در سطح آنتی ژن می باشند. شناسایی آنتی بادی ها توسط تست های سرولوژیکی می تواند در مطالعه بیماری های MAP با اهمیت باشد.