ساخت یک سازه بهینه شده لنتی ویروسی نوترکیب حاوی ژن pdx-1 برای انتقال ژن به سلول های بنیادی در راستای ژن درمانی دیابت نوع 1

امروزه بسیاری از پروتکل های ژن درمانی با حامل های لنتی ویروسی انجام می شود. یکی از مهم ترین فاکتورهایی که در تکوین پانکراس و رونویسی ژن انسولین نقش دارد فاکتور رونویسی Pancreatic & duodenal homeobox 1 (Pdx-1) است. هدف از این مطالعه بهینه سازی سازه لنتی ویروسی حاوی ژن pdx-1 برای ترانسفکشن سلول های بنیادی در راستای ژن درمانی دیابت نوع 1 بود.
در این مطالعه تجربی ابتدا ژن pdx-1 از حامل pcDNA3.1-pdx-1به وسیله PCR تکثیر و در حامل pTG19–Tکلون شد. سپس ژن pdx-1 در بالا دست ژن IRES–EGFPدر حامل pIRES2–EGFP ساب کلون شد. در مرحله بعد قطعات کلون شده IRES–EGFP و نیز pdx-1 با هضم آنزیمی از حامل مربوطه جداسازی و به درون سازه ی بیانی لنتی ویروسی pSINTREM در بالا دست ژن TRE-CMVکلون شدند. سازه ی نهایی پس از تعیین توالی به سلول های HEK293 ترانسفکت شد و بیان ژن pdx-1 به وسیله آنالیز فلوسایتومتری و میکروسکوپ معکوس فلورسنت ارزیابی شد.
نتایج فلوسایتومتری و نیز مشاهده مستقیم با میکروسکوپ معکوس فلورسنت، نشانگر تایید بیان ژن های pdx-1 و GFP در سلول های HEK293 ترانسفکت شده با سازه نوترکیب نهایی بود.
با توجه به این که سازه حاضر به منظور تضمین بیان طولانی مدت با بازدهی بالا در سلول های بنیادی طراحی شده و از سامانه ی القایی Tet onهای در آن استفاده شد، می تواند یکی از بهترین سازه ها در جهت انتقال هر نوع ژن به سلول های بنیادی باشد.