کلونینگ آنزیم فیتاز پنیوفورا لایسی حاوی برچسب هیستیدین در مخمر

فیتیک اسید، یکی از ترکیبات معدنی بسیار مهمی است که در درون گیاهان ذخیره می شود. فیتاز (E.C. 3.1.3.8 یا E.C. 3.1.3.26) به صورت گسترده ای به عنوان یک افزودنی جهت افزایش جذب فسفر و سایر عناصر در حیوانات تک معده ای به غذای آنها اضافه شده و بدین ترتیب سبب کاهش دفع فسفات به داخل محیط می گردد. در این تحقیق، کلونینگ و افزودن برچسب شش آمینواسیدی هیستیدین به ژن نوترکیب فیتاز در باکتری اشرشیا کلی و سپس مخمر، به منظور خالص سازی آنزیم تولید شده در مقادیر بالا در این میزبان، انجام شد.
توالی پروتئینی آنزیم فیتاز قارچ P. lycii از بانک های اطلاعاتی پروتئین استخراج شده و با توجه به ترجیح کدنی مخمر، توالی ژن طراحی و سنتز گردید. با طراحی پرایمرهای مناسب توالی حاوی شش هیستیدین به ژن مورد نظر داخل حامل دوگانه ی pFPMTMF 14α''> اضافه شده و در نهایت با استفاده از الکتروپوریشن به داخل مخمر انتقال یافت.
سازه ی نوترکیب حاوی ژن فیتاز به همراه برچسب شش آمینواسیدی هیستیدین تولید شد. حضور ژن در داخل باکتری و مخمر با استفاده از روش های هضم آنزیمی و PCR تایید گردید.
کلونینگ موفق ژن فیتاز قارچی حاوی برچسب شش هیستیدین، در باکتری اشرشیاکلی و مخمر به منظور بیان بالا و سپس خالص سازی این آنزیم، انجام شد.