شناسایی و بیان ژنGRA7 توکسوپلاسما گونده ای سویه RH در پلاسمید یوکاریوت بیانی pcDNA3

توکسوپلاسموزیس از بیماری های شایع جهان است و بیشتر به علت عوارض وخیمی که در موارد مادرزادی و بیماران مبتلا به ایدز ایجاد می کند، اهمیت دارد. یکی از راه های پیشگیری از این انگل در انسان و دام استفاده از واکسن می باشد. آنتی ژن گرانولی 7 (GRA7) یک آنتی ژن فشرده ترشحی 29 کیلودالتونی توکسوپلاسما گونده ای می باشد که در واکوئل پارازیتوفروس تولید شده، توسط سلول های آلوده میزبان آزاد می شود و به عنوان کاندیدای تهیه واکسن مطرح می باشد.

در این مطالعه تجربی پلاسمید حاوی ژن GRA7 از باکتری TOPO استخراج شد. سپس این پلاسمید با آنزیم های BamH1 و EcoR1 برش داده شد. ژن جدا شده وارد پلاسمید pcDNA3 گردید. این کلونینگ با روش های PCR و تعیین توالی تایید شد. بیان پروتئین نیز با روش های SDS-PAGE و وسترن بلات تایید شد.

نتایج نشان داد که ژن GRA7 در پلاسمیدpcDNA3 کلون شده است و نتایج PCR پلاسمید pcDNA3 حاوی ژن GRA7 قطعه bp 733 را نشان داد. بیان pcGRA7 در سلول های CHO با استفاده از روش های SDS-PAGE و وسترن بلات باند 29 کیلودالتونی را نشان داد.

نتایج حاصل نشان داد که کلونینگ ژنGRA7 در پلاسمید pcDNA3 انجام شده و پلاسمید نوترکیب در سلول های یوکاریوتیک بیان گردیده است لذا، قابلیت آن را دارد که برای تحقیقات تهیه واکسن DNA استفاده شود.