تخلیص هورمون hCG از ادرار زنان باردار و جداسازی زیرواحدهای آن

هورمون hCG از گلیکوپروتئین های مهم دوران بارداری جهت حفظ جنین است که تقریبا 30 درصد وزن مولکولی این هورمون را قند تشکیل می دهد. امروزه از این هورمون در درمان و هم چنین ساخت واکسن های ضد بارداری استفاده می شود. در تحقیق حاضر سعی در افرایش میزان خلوص و کوتاه کردن مسیر تخلیص این هورمون است.
جهت تخلیص هورمون hCG از نمونه ادرار زنان باردار دو تا سه ماهه استفاده شد. نمونه جمع آوری شده توسط بنزوات سدیم، اسید استیک و استون رسوب دهی و تغلیظ گردید. با عبور نمونه تغلیظ شده از ستون کانکاناوالین A (Con-A) و جدا کننده های دی گلوکز و دی مانوز، hCG تخلیص گردید. با عبور نمونه hCG تخلیص شده از ستون DEAE-Sepharose 4B، زیرواحدهای آلفا و بتای هورمون جداسازی گردید. خلوص نمونه ها به وسیله SDS-PAGE و صحت آنها با روش الایزا و ایمونوبلاتینگ بررسی شد.
نمونه تغلیظ شده به دست آمده از ادرار و نمونه hCG تخلیص شده از ستون کانکاناوالین A، با استاندارد hCG از شرکت ارگانون از نظر وزن مولکولی و میزان خلوص با روش SDS-PAGE و رنگ آمیزی نیترات نقره مقایسه شدند. نمونه تغلیظ شده شبیه نمونه استاندارد و دارای تعدادی باند اضافی بود که باندهای اضافی بعد از تخلیص hCG حذف گردید. تایید هورمون hCG و زیرواحدهای آن با استفاده از آنتی بادی های مونوکلونال ضد زنجیره α و β به روش الایزا و وسترن بلات انجام گرفت.
استفاده از قند دی گلوکز قبل از دی مانوز توانست باعث جداسازی hCG از سایر قطعات hCG و گلیکوپروتئین ها شود.