سنتز و کلون سازی ژن کد کننده پپتید ترکیبی VP4-VP6 متعلق به روتاویروس

سالانه 111 میلیون مورد اسهال روتاویروسی گزارش می شود. درمان اختصاصی برای اسهال روتاویروسی وجود ندارد و پیشگیری موثر اهمیت دارد. واکسیناسیون، تنها راه کاهش مرگ و میر ناشی از اسهال روتاویروسی است، زیرا رعایت بهداشت آب و مواد غذایی تاثیر چندانی در کنترل بیماری ندارد. در مطالعه حاضر با استفاده از روش های مهندسی ژنتیک پلی پپتیدی مرکب از چندین اپی توپ روتاویروس تولید شده که در صورت تائید کارآیی آن به عنوان واکسن روتاویروس قابل استفاده است.
در این تحقیق شیوع گونه های مختلف ویروس در ایران بررسی شد. سروتیپA شایع ترین سروتیپ مطرح گردید. توالی کامل ژنوم این سروتیپ بدست آمد. با استفاده از ابزار های بیوانفورماتیک شامل نرم افزار Hex و سرور Phyre ساختار پروتئینهای سطحی ویروس پیشگویی شد. 4 اپیتوپ از دو پروتئین سطحی ویروس شناسایی و توالی ژنوم آنها مشخص شد. با استفاده از نرم افزار Gene Runner پرایمرها به گونه ای طراحی شد که هر جفت پرایمر یک اپیتوپ را تشکیل داد.
پرایمرها دارای نواحی همپوشان بودند، روش SOE-PCR برای اتصال آنها استفاده شد. در الکتروفورز ژل آگارز اتصال پرایمرها و رشد قطعات به وضوح دیده شد. قطعه ترکیبی کلون و بیان اولیه در سیستم پروکاریوتی بررسی شد. محصول نهایی از نظر وزن مولکولی دقیقا در محل مورد انتظار در مقایسه با مارکر واقع شد.
در این تحقیق با استفاده از SOE-PCR توالی کد کننده چهار اپی توپ روتاویروسی به هم متصل شده و قطعه نوترکیب نهایی در سیستم پروکاریوتی بیان گردید. پروتئین نوترکیب از نظر وزن مولکولی در ناحیه مورد انتظار قرار گرفت.