شناسایی ژنتیکی مخمرهای مقاوم به سیکلوهگزامید جداسازی شده از محصولات لبنی سنتی

محصولات لبنی تولید شده به روش های سنتی دارای فلور میکروبی بسیار پیچیده ای شامل میکروارگانیسم های همچون باکتری های اسید لاکتیک و مخمرها هستند. روش رایج برای برای شناسایی باکتری های اسید لاکتیک عبارت است از کشت دادن آنها در محیط کشت هایی حاوی آنتی بیوتیک سیکلوهگزامید، که با مهار سنتز پروتئین از رشد مخمرها جلوگیری می کند. با این حال، برخی از مخمرها مقاومت طبیعی و یا اکتسابی به این آنتی بیوتیک نشان داده و و بنابراین به صورت انتخابی بر روی محیط رشد می کنند. در این تحقیق تلاش شد تا این گروه از مخمرها از محصولات لبنی جداسازی و شناسایی شوند. بدین منظور 25 نمونه محصول لبنی تولید شده به صورت سنتی در محیط کشت ام.آر.اس حاوی 01/0 درصد سیکلوهگزامید کشت داده و پس از گرمخانه گذاری 48 (ساعت در ̊C30)، 32 کلونی که از لحاظ ظاهری به مخمرها شباهت داشتند برداشته شدند. انجام تست کاتالاز و بررسی های میکروسکوپی نشان دهنده ی حضور 19 مخمر درمیان 32 جدایه بود. پس از استخراج DNA ژنومی از هر جدایه، PCR به منظور تکثیر تصادفی قطعات DNA(RAPD-PCR) با استفاده از آغازگر M13 انجام شد تا اطلاعاتی درمورد خویشاوندی ژنتیکی میان جدایه ها بدست آید. مقایسه چشمی الگوهای باندی RAPD-PCR بدست آمده منجر به انتخاب 5 مخمر به عنوان نماینده برای شناسایی بیشتر شد. در ادامه، آغازگرهای IST1 و IST4 برای تکثیر اختصاصی استفاده شدند و محصولات PCR پس از خالص سازی مورد آنالیز توالی یابی قرار گرفتند. نتایج توالی یابی نشان داد که همگی مخمرهای جدا شده به گونه کلایورومایسس مارکسیانوس تعلق دارند که گونه ای با توانایی تکنولوژیکی بالا است.