بیان، استخراج، تخلیص و بررسی ایمنی زایی سه پروتئین نوترکیبLTB، THc، BoNT/A و مقایسه تیتر آنتی بادی تولید شده علیه آن ها در حیوان آزمایشگاهی

در میان عوامل باکتریایی، شایع ترین عامل بیماری اسهال، باکتری اشریشیا کلی انتروتوکسیژنیک است. تزریق زیرواحد LTB توکسین آن قادر به ایجاد مصونیت شش ماهه در میزبان است. توکسین تتانوس کلستریدیوم تتانی عامل بیماری مهلک کزاز است. به وسیله واکسن توکسوئید کزاز می توان از بیماری کزاز جلوگیری نمود. این مصونیت تا 10 سال در انسان ادامه می یابد. ناحیه اتصالی توکسین کزاز (THc) بخش اصلی در ایمنی زایی این توکسین محسوب می شود. کلستریدیوم بوتولینوم عامل بیماری بوتولیسم است. تزریق واکسن توکسوئید بوتولینوم نیز مصونیت 2 ساله علیه بیماری ایجاد می کند. هدف از این مطالعه، تولید و بررسی ایمنی زاییLTB، BONT/A و THc در حیوان می باشد.
از سه باکتری E.Coli Bl21 DE3 تراریخت شده با وکتور pET28a که به طور جداگانه حاوی سه ژن نوترکیب ltb، bont/a-Hc و thc بودند، جهت بیان پروتئین های نوترکیب فوق استفاده شد. هر سه پروتئین مورد نظر استخراج، تخلیص و بر روی ژل SDS-PAGE بررسی گردیدند. سپس ایمنی ز ایی موش های آزمایشگاهی به وسیله این سه پروتئین صورت گرفت. تیتر آنتی بادی حاصل از پروتئین های نوترکیب با استفاده از تست الایزا و آزمون آماری دو طرفه آنووا مورد ارزیابی و مقایسه قرار گرفت.
نتایج ارزیابی ژل SDS-PAGE بیان و تخلیص مناسب هر سه پروتئین را نشان داد. نتایج ایمنی زایی و تست های الایزای سرم این سه گروه ایمن شده نشان داد که تیتر آنتی بادی علیه پروتئین نوترکیب THc بالاتر از پروتئین های نوترکیب LTB و BONT/A است. هم چنین تفاوت معنی داری بین تیتر آنتی بادی(BoNT/A-Hc and LTB (P value <.0001 مشاهده گردید.
اختلاف در تیتر آنتی بادی این سه گروه ممکن است به طول عمر سلول های خاطره حاصله در این گروه ها ارتباط داشته باشد. هر چند که نتایج نیاز به مطالعات بیش تری دارد.