تاثیر همزمان 5-Azacytidin و DMSO در القای تمایز کاردیومیوسیت ها از سلول های کارسینومای جنینی P19 در شرایط آزمایشگاهی

در مطالعه حاضر توانایی تمایز سلولهای کارسینومای جنینی P19 در حضور همزمان 5-Azacytidin و DMSO به کاردیومیوسیت ها مورد ارزیابی قرار گرفت.
جهت تمایز سلولهای P19 اجسام شبه جنینی (Embryoid Bodies،EBs) بهروش قطرات آویزان طی 2 روز تشکیل شدند. سپس EBs به مدت 10 روز تحت القای 2 میکرومولار DMSO (DMSO group)، (5-Aza group) 5-Azacytidin پنج درصد و ترکیب DMSO، Aza+DM group) 5-Azacytidin) قرار گرفتند. طی تمایز تعداد ضربان در دقیقه هر دو روز یکبار در گروه های مختلف به وسیله میکروسکوپ معکوس شمارش شدن د. بیان ژن های نظیر (Myosin Light، (α-Myosin Heavy Chain، α-MHC) (Connexin- و (43 Chain، MLC) به وسیله RT-PCR در روز دهم پس از القا بررسی شدند. جهت بیان پروتئین F-actin از ایمونوسیتوشیمی استفاده شد.
تغییرات مورفولوژیکی زیادی در کاردیومیوسیتهای مشتق شده از P19 به ویژه در گروه Aza+DM group ایجاد شد به طوریکه افزایش مشخصی در اندازه سیتوپلاسم و زواید سیتوپلاسمی آنها دیده شد و به تدریج شاخه شاخه شدن زوائدشان افزایش یافت و با سلولهای مجاور ارتباط برقرار کردند. نتایج شمارش روزانه تعداد ضربان در دقیقه در تمامی گروه ها از روز 2+2 مشاهده شده و تا روز 8+2 بتدریج افزایش یافته است. در سلولهای P19 که تحت القای همزمان DMSO و 5- Aza بودند ژن های MLC و α-MHC بیان شدند. کاردیومیوسیتهای Aza+DM group پروتئین F-actin را بیان کردند در حالیکه این پروتئین در سایر گروه ها مشاهد نشد.
کاربرد همزمان ترکیبات DMSO و 5- Azacytidin موجب بهینه سازی محیط کشت تمایزی کاردیومیوسیت ها از سلولهای P19 میگردد.