راه اندازی روش Real-time PCR بر پایهgreen SYBRجهت تعیین الل های HLA-DQ در بیماران مبتلا به سیلیاک

از عوامل ژنتیکی مهم در ابتلا به بیماری سیلیاک، حضور الل های HLA-DQ2 و HLA-DQ8 در افراد مبتلا می باشد. روش های مولکولی زیادی جهت تعیین این الل ها در دسترس می باشد اما این روش ها علاوه بر هزینه بالا، دارای مراحل متعددی هستند که استفاده از آن ها را دشوار کرده است، لذا هدف از این مطالعه، راه اندازی تکنیک ساده و سریع جهت تعیین الل های HLA-DQ در بیماران مبتلا به سیلیاک با روش SYBR g reen r eal- t ime PCR بود.
به منظور تعیین نوع HLA-DQ و ارزیابی کارایی روش SYBR g reen r eal- t ime PCR، DNA آن دسته از بیماران سیلیاکی که بیماری آن ها با استفاده از روش های سرولوژی و پاتولوژی تایید شده بود، استخراج شد. در مرحله بعد، از پرایمرهای اختصاصی جهت بررسی الل های HLA-DQA1*05، HLA-DQB1*02 و HLA-DQB1*0302 استفاده شد و نتایج به دست آمده با کیت های تجاری در دسترس مقایسه گردید.
با استفاده از این روش حضور الل های HLA-DQ2 و HLA-DQ8 با حساسیت و اختصاصی 100 درصد تعیین شد و نتایج حاصل از این روش در مقایسه با کیت های تجاری در دسترس با قدرت تفکیک پایین، کارایی بالاتری را نشان داد.
روش SYBR g reen- r eal t ime PCR به همراه آنالیز منحنی ذوب آن، جهت شناسایی الل های HLA-DQ-2 و HLA-DQ8 کارایی مناسبی داشته و نسبت به روش های معمول HLA تایپینگ در ایران، سریع تر و آسان تر بوده و برای تشخیص این الل ها، درجه حساسیت و اختصاصی بالایی دارد.