همسان سازی و بیان نوترکیب دمین انتهای کربوکسیل پروتئین اینتیمین پاتوژن EHEC در باکتری اشرشیا کلی سویه (BL21(DE3

بخشی از عفونت های روده ای به واسطه پاتوژن هایی به وجود می آیند که با مصرف مواد غذایی آلوده وارد سیستم گوارش انسان می شوند. در لانه گزینی باکتری E. coli O157:H7 در روده بزرگ مجموعه ای از پروتئین ها که برخی از آنها شروع کننده این فرآیند بوده و فقدان آنها مانع از این پدیده می شود، دخیل هستند. هدف از انجام این پژوهش همسان سازی و بیان نوترکیب پلی پپتید انتهای کربوکسیل پروتئین اینتیمین به طول 311 اسید آمینه به عنوان کاندید واکسن علیه E. coli O157:H7 بوده است.
طراحی پرایمر اختصاصی برای ژن eae با استفاده از نرم افزارOligo نسخه 7 انجام شد و تکثیر ژن به وسیله واکنش PCR از روی DNA الگو صورت گرفت. واکنش های هضم آنزیمی و الحاق ژن، درون وکتور pET28a(+) انجام شد. پس از تایید همسان سازی ژن، بیان نوترکیب پروتئین اینتیمین با استفاده از القاگر IPTG صورت گرفت. برای تایید پروتئین اینتیمین، آنالیز وسترن بلات انجام شد.
همسان سازی ژن eae درون وکتور pET28a(+) به شکل مناسب بین جایگاه های مطلوب انجام شد و پروتئین اینتیمین پس از القا، بیان نوترکیب مناسب و قابل توجهی را نشان داد. آنتی بادی مورد استفاده در وسترن بلات نیز توانست به شکل مناسبی اینتیمین را شناسایی کند.
در این مطالعه، سازه پایدار محتوی ژن eae ساخته شد که بیان نوترکیب قابل توجهی از پروتئین اینتیمین را از خود نشان داد. بنابراین، این سازه را می توان برای تولید پروتئین اینتیمین جهت مطالعات ایمنی زایی علیه E. coli O157:H7 به کار برد.