بررسی بیان پروتئین gp40/15 کریپتوسپوریدیوم پارووم در E. coli

کریپتوسپوریدیوم یک انگل تک یاخته ای دارای اهمیت در پزشکی و دامپزشکی است که سبب اسهال و استفراغ در طیف وسیعی از مهره داران می شود. برخی از آنتی ژن های سطحی انگل از جمله gp40/15 در اتصال و تهاجم به سلول میزبان و تحریک سیستم ایمنی نقش مهمی بر عهده دارند. با کلون و بیان نمودن این آنتی ژن ها امکان دسترسی به پروتئین های نوترکیب انگل فراهم می شود. هدف این مطالعه بیان ژن gp40/15 کریپتوسپوریدیوم پارووم در باکتری اشرشیاکلی است.
توالی ژن gp40/15 کریپتوسپوریدیوم پارووم از بانک ژن به شماره AF155624 استخراج و به صورت صناعی در PET28a+ کلون و تهیه گردید. جهت تایید از روش های ColonyPCR و هضم آنزیمی به وسیله آنزیم های محدودکننده BamHI وXhoI استفاده شد. پلاسمید نوترکیب به داخل باکتری اشرشیاکلی منتقل شده و بیان پروتئین با استفاده از SDS-PAGE، وسترن بلات و الایزا با استفاده از سرم حاوی آنتی بادی بر ضد انگل کریپتوسپوریدیوم پارووم تایید شد و سپس با ستون کروماتوگرافی تخلیص گردید.
نتایج نشان داد که ژن gp40/15 درپلاسمید PET28a+ کلون شده است و نتایج ColonyPCR و هضم آنزیمی پلاسمید PET28a+ حاوی ژن gp40/15، قطعه 921bp را نشان داد. بیان pEgp40/15 در باکتری اشرشیاکلی با استفاده از روش های SDS-PAGE، وسترن بلات والایزا تایید شد و باندی در حدود 43 کیلودالتون را نشان داد.
ژن gp40/15 کلون شده در پلاسمید بیانیPET28a+ به طور موفقیت آمیزی در باکتری اشرشیا کلی بیان شده و پروتئین نوترکیب gp40/15 در آن تولید شده است. لذا، می توان از این پروتئین در مطالعات بعدی جهت ساخت واکسن های پروتئینی نوترکیب و طراحی کیت تشخیصی استفاده نمود.