زیرهمسانه سازی و بررسی بیان ژن صناعی ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ (B (BD/B

سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می شود. این نوروتوکسین دارای 7 سروتیپ از A-G می باشد. بهترین راه برای جلوگیری از سندرم بوتولیسم ایجادشده توسط BoNT/B، استفاده از واکسن های نوترکیب ساخته شده از ناحیه اتصالی آن (به علت داشتن اپی توپ های کافی برای تحریک سیستم ایمنی) است. در این پژوهش بیان زیرواحد اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ B، به منظور کاندید واکسن مورد بررسی قرار گرفت.
ابتدا توالی ژن ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ Bاز سایت NCBI با کد دسترسی EF028399.1 گرفته شد. بعد از بهینه سازی کدون، ژن مورد نظر به صورت صناعی در داخل وکتور pUC18 تهیه گردید. سپس این ژن در وکتور بیانی pET32a(+) که دارای مارکر انتخابی آمپی سیلین می باشد، زیرهمسانه سازی شد. جهت تایید صحت زیرهمسانه سازی؛ از PCR، برش آنزیمی و تعیین توالی و برای بررسی بیان از سوش E. coli BL21(DE3) استفاده گردید. صحت بیان پروتئین با الکتروفورز (تحت شرایط مختلف و روش وسترن بلات) مورد بررسی قرار گرفت.
واکنش های PCR، برش آنزیمی را براساس سایت های برشی در وکتور و در نهایت، تعیین توالی تایید کرد که ژن مورد نظر به طور مناسب در وکتور pET32a(+)، همسانه سازی شد. بررسی بیان با استفاده از SDS- PAGE و متعاقب آن انجام وسترن بلاتینگ نشان داد پروتئین مورد نظر در سویه بیانی مذکور بیان نمی شود.
اگرچه ژن مورد نظر در داخل وکتورpET32a(+)، به طور مناسب زیرهمسانه سازی گردید، با این حال هیچ بیان قابل مشاهده ای از ژن مورد نظر دیده نشد.