بهینه سازی تشخیص همزمان سالمونلا و اشرشیاکلی O157:H7 در فرآورده های گوشتی و بررسی میزان آلودگی با روش Multiplex PCR

سالمونلا و اشرشیا کلی از مهم ترین پاتوژن های آلوده کننده مواد غذایی به ویژه فرآورده های گوشتی هستند. تشخیص سریع، اختصاصی و همزمان این پاتوژن ها با انتخاب و بهینه سازی ژن های اختصاصی از اهمیت بالایی برخوردار است. این مطالعه با هدف تشخیص توام سالمونلا و اشریشیا کلی O157:H7 در فرآورده های گوشتی و بررسی میزان آلودگی بر مبنای تکثیر دو ژن rfbE و invA با روش Multiplex PCR در استان زنجان واقع در شمال غربی ایران انجام گرفت.
تعداد 74 نمونه گوشت به صورت تصادفی از نواحی مختلف استان زنجان جمع آوری شد. 25 گرم از هر نمونه گوشت در 225 میلی لیتر محیط مولر هینتون براث به طور کامل یکنواخت سازی و گرماگذاری گردید. جدایه های باکتری خالص سازی شد و استخراج DNA انجام گردید. تکثیر همزمان قطعات ژنی rfbE و invA با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و با بهینه سازی واکنش PCR چندگانه انجام گرفت. در نهایت، حساسیت این روش با تلقیح رقت های مختلف از باکتری ها به نمونه های گوشتی بررسی گردید.
از بین 74 نمونه گوشتی، تعداد 6 نمونه (1/8 درصد) به اشریشیا کلی O157:H7، تعداد 4 نمونه (4/5 درصد) به سالمونلا و تعداد 2 نمونه (7/2 درصد) به هر دو باکتری آلوده بودند. واکنش PCR چندگانه در تشخیص توام هر دو پاتوژن در کمترین رقت تلقیح شده به نمونه های گوشتی نیز از حساسیت بالایی برخوردار بود.
در این مطالعه، واکنش PCR چندگانه بر اساس ژن های بیماری زایی سالمونلا و اشریشیا کلی O157:H7 جهت تشخیص سریع و همزمان این پاتوژن ها با حساسیت و اختصاصیت بالا بهینه شد. واکنش PCR چندگانه به منظور شناسایی همزمان پاتوژن های منتقله از راه غذا در کنترل آلودگی های مواد غذایی روش قابل اعتمادی است.