کلون سازی و بررسی بیان ژن nlpD اسینتوباکتر بومانی در سلول های HDF انسان به روش RT-PCR

اسینتوباکتر بومانی یکی از باکتری های بسیار مقاوم در برابر انواع آنتی بیوتیک ها در جهان است. این باکتری عامل عفونت های بیمارستانی به صورت بومی یا همه گیر بوده و هنوز واکسن موثری علیه آن وجود ندارد. NlpD یکی از عوامل آنتی ژنی مهم است که سبب تحریک سیستم ایمنی میزبان می گردد. بنابراین، هدف از این تحقیق، کلون سازی و بررسی بیان ژن nlpD باکتری اسینتوباکتر بومانی در سلول های HDF (Human dermal fibroblast) است.
در این تحقیق تجربی ژن nlpD از روی ژنوم اسینتوباکتر بومانی با استفاده از روش PCR تکثیر شد. سپس، ژن مذکور به ترتیب در ناقل های pTZ57R/T و pIRES2-EGFP کلون سازی و ساب کلون گردید. تایید صحت کلون سازی ژن با سه روش PCR، آنزیم های برش دهنده و تعیین توالی مورد ارزیابی قرار گرفت. سپس، ناقل نوترکیب نهایی pIRES2-EGFP-nlpD با کمک الکتروپوریشن به سلول های HDF منتقل گردید و بیان ژن هدف در این سلول ها با روش RT-PCR بررسی شد.
قطعه 831 جفت بازی مربوط به ژن nlpD اسینتوباکتر بومانی با موفقیت تکثیر شد. هم چنین، نتایج تحقیق نشان داد که سازواره نهایی pIRES2-EGFP-nlpD تشکیل گریده است. مشاهده باند 831 جفت بازی پس از انجام RT-PCR، در سلول های ترانسفورم شده نسبت به سلول های شاهد، موید بیان ژن nlpD در سلول هایHDF می باشد.
سازواره نهایی ساخته شده در این تحقیق توان بیان ژن nlpD اسینتوباکتر بومانی را در سلول های یوکاریوتی دارد. بیان موفق ژن هدف می تواند در راستای بررسی ایمنی زایی در حیوانات آزمایشگاهی به عنوان یک واکسن نوترکیب مدنظر قرار گیرد. هم چنین، سازواره pIRES2-EGFP-nlpD از پتانسیل لازم برای بررسی به عنوان واکسن ژنی در تحقیقات آینده برخوردار است.