ایمنی زائی نانوذرات PLGA واجد پروتئین نوترکیب CfaB از اشریشیا کولی انتروتوکسیژنیک

باکتری اشریشیا کولی انتروتوکسیژنیک، از عوامل شایع اسهال می باشد. با بروز مقاومت آنتی بیوتیکی، ساخت ایمنوژن موثر علیه باکتری ضروری است. فاکتورهای کلونیزاسیون از مهمترین کاندیدای واکسن علیه ETEC می باشند. بارگذاری ایمنوژن های نوترکیب از جمله فاکتورهای کلونیزاسیون در نانو حاملها، سبب محافظت آنها در برابر عوامل محیطی شده، غلظتهای مناسب از ایمونوژن را فراهم و فعالیت زیستی را افزایش می دهد. هدف از این تحقیق بررسی ایمنی زائی پروتئین CfaB بارگذاری شده در نانوذرات PLGA می باشد.
در این مطالعه تجربی، بهینه سازی کدونی ژن cfaB با نرم افزار OPTIMIZER انجام شد. بیان پروتئین در E.coli با IPTG القا گردید. پروتئین به روش کروماتوگرافی میل ترکیبی تخلیص و با وسترن بلاتینگ ارزیابی شد. نانوذراتPLGA به روش امولسیون دوگانه تهیه و خصوصیات ساختاری با SEM و DLS بررسی گردید. ایمن سازی 40 موش BALB/C در چهار گروه 10 تایی انجام شد و به گروه اول 20 میکروگرم از پروتئین بارگذاری شده در نانوذره، گروه دوم پروتئین به همراه ادجوانت فروند و گروه سوم و چهارم به ترتیب نانوذرات بدون آنتی ژن و بافر PBS تجزیه شد. تزریقات با فاصله دو هفته ای و چهار بار انجام شد و یک هفته پس از تزریقات خونگیری از چشم حیوانات انجام شد و تیتر آنتی بادی با روش الایزا تعیین گردید. ممانعت سرم از اتصال باکتری ETEC به سلول Caco2 بررسی شد.
ژن بهینه سازی شده شاخص سازگاری کدون 0/85 را دارا شد. بیان پروتئین منجر به تولید CfaB با وزن 18/9 کیلودالتون شد. میزان پروتئین 5 میلی گرم در لیتر بود. ظرفیت بارگذاری پروتئین در نانوذرات PLGA، 85 درصد بود. متوسط اندازه نانوذرات 170 نانومتر بود. ایمن سازی موشها پاسخ آنتی بادی سرمی را القا کرد. سرم ایمن اتصال ETEC به سلول Caco2 را 62/8% کاهش داد.
نتایج مطالعه نشان داد که پروتئین نوترکیب CfaBبارگذاری شده در نانوذرات PLGA ایمنی علیه باکتری ETECرا تحریک می کند.