کلون سازی و بررسی بیان ژن ureB هلیکوباکتر پیلوری با استفاده از وکتور بیانی pcDNA3. 1 ()

هلیکوباکتر پیلوری عامل بیماری هایی مانند گاستریت، زخم های گوارشی و سرطان غدد لنفاوی و دستگاه گوارشی است. هنوز واکسن موثری علیه هلیکوباکتر پیلوری تولید نشده است. آنزیم اوره آز یکی از عوامل مهم تحریک سیستم ایمنی میزبان است. بنابراین هدف این تحقیق کلون سازی و بررسی بیان ژن ureB به عنوان کاندیدای واکسن ژنی علیه هلیکوباکتر پیلوری می باشد.
در این بررسی تجربی، ژن کد کننده ی ureB از ژنوم هلیکوباکتر پیلوری به روش PCR جدا شد. محصولات PCR به روش کلون سازی T/A در وکتور pTZ درج شدند و سپس با آنزیم های XhoI و XbaI بریده شده و وارد وکتور بیانی pcDNA3. 1() گردیدند. وکتور نهایی pcDNA3. 1()-ureB به روش الکتروپوریشن در سلول های CHO ترانسفرم شد. برای بررسی بیان پروتئین از روش SDS-PAGE استفاده شد.
نتایج نشان دهنده تشکیل وکتور نوترکیب pTZ-ureB می باشد. هضم آنزیمی و تعیین توالی نیز صحت کلونینگ ژن ureB در وکتور pcDNA3. 1() را تایید کرد. نتایج الکتروپوریشن و سپس بررسی بیان ژن کلون شده در سلول های جانوری، تشکیل باند پروتئینی مورد نظر را روی ژل SDS-PAGE نشان داد.