خالص سازی آنزیم لاکاز قارچ Trametes و تعیین خصوصیات فیزیکوشیمیایی لاکاز نوترکیب: یک مطالعه آزمایشگاهی

لاکازها یکی از اصلی ترین پروتین ها با قابلیت کاتالیز اکسیداسیون ترکیبات فنولی می باشند که به عنوان بیوکاتالیست در بیوتکنولوژی جهت رنگ بری و رنگ زدایی در صنایع رنگ، سم زدایی در محیط زیست، شفاف سازی آب میوه ها در صنایع غذایی کاربرد دارند. هدف از این پژوهش، تولید لاکاز نوترکیب، خالص سازی با بازده بالا و تعیین خصوصیات بیوشیمیایی و کینتیکی لاکاز تخلیص شده می باشد. در این مطالعه آزمایشگاهی، لاکاز نوترکیب قارج ترامتوس که در میزبان مخمری به شکل خارج سلولی، بیان شده است. طی چندین مرحله با استفاده از روش های اولترافیلتریزاسیون و کروماتوگرافی به روش ژل فیلتریزاسیون تخلیص شد و کارآیی روند تخلیص تعیین و پس از تعیین وزن مولکولی، خصوصیات فیزیکوشیمیایی لاکاز نوترکیب بررسی و میزان پایداری حرارتی آنزیم تعیین شد. تمامی آزمون ها با انجام حداقل 3 تکرار و احتساب میانگین و انحراف از معیار انجام گردید. نتایج نشان داد لاکاز با موفقیت و بازده 67/5 برابر با حفظ 7/49 درصد فعالیت آنزیمی تخلیص شد و وزن مولکولی لاکاز نوترکیب 65 کیلو دالتون تعیین شد. دما و pH بهینه لاکاز تخلیص شده به ترتیب C°60 و 8/4 تعیین شد. خصوصیات کینتیکی آن نیز تعیین شد. بررسی پایداری دمایی لاکاز نوترکیب نشان داد که لاکاز پایداری بالایی در برابر حرارت دارد. نتایج نشان داد که روش کروماتوگرافی ژل می تواند روشی کارآمد جهت خالص سازی لاکاز نوترکیب با حفظ خصوصیات آنزیمی و پایداری حرارتی بالا باشد، به طوری که لاکاز نوترکیب تخلیص شده با بازده بالا و حفظ فعالیت می تواند در صنایع دارویی، نساجی، محیط زیست و غذایی و سم زدایی محیط زیست، کاربرد داشته باشد.