شناسایی حالت زنده اما غیرقابل کشت باکتری اشریشیا کلی (Escherichia coli O157:H7) با استفاده از وارونویسی واکنش زنجیره ای پلیمراز (RT-PCR)

باکتری های متعددی همانند اشریشیا کلی تحت شرایط نامساعد می توانند وارد حالت زنده اما غیرقابل کشت (VBNC) شوند که با روش های تشخیص بر پایه کشت باکتری قادر به شناسایی نیستند. در تحقیق حاضر، وارونویسی واکنش زنجیره ای پلیمراز (RT-PCR) برای تشخیص باکتری Escherichia coli O157:H7 در حالت VBNC بررسی شد. باکتری E. coli O157:H7 به تیمارهای آب مقطر و آب نمک 30درصد تلقیح و در دمای اتاق نگهداری شد. کشت پذیری باکتری ها روی محیط کشت مک کانکی آگار تعیین شد. RT-PCR ژن 16S rRNA شامل استخراج و تخلیص RNA، تیمار DNase I برای حذف آلودگی DNA و سپس سنتز cDNA و الکتروفورز محصول PCR نمونه های cDNA برای تشخیص زنده مانی باکتری E. coli O157:H7 تحت تیمارهای مورد مطالعه به کار رفت و با نتایج RT-PCR ژن 16S rRNA در باکتری های کشته شده به وسیله حرارت مقایسه شد. کشت پذیری باکتری ها در تیمار آب مقطر طی مدت مطالعه حفظ شد؛ اما تیمار آب نمک 30 درصد باعث کشت ناپذیری باکتری در روز چهارم مطالعه شد. نتایج RT-PCR ژن 16S rRNA بیانگر حفظ بیان این ژن در باکتری های کشت پذیر و غیرقابل کشت طی مدت مطالعه بود، در حالی که در باکتری های کشته شده به وسیله حرارت بیان این ژن منفی بود که نشان دهنده کارایی RT-PCR ژن 16S rRNA در تشخیص باکتری های زنده از غیرزنده بود. باکتری E. coli O157:H7 تحت استرس شوری 30 درصد وارد حالت VBNC شد که می تواند باعث مخاطراتی جدی برای سلامت انسان شود. وارونویسی واکنش زنجیره ای پلیمراز (RT-PCR) می تواند برای تشخیص باکتری های VBNC به کار رود.