طراحی یک روش سریع تک مرحله ای دیداری جهت تشخیص سالمونلا بر اساس روش IC-LAMP

پیشینه:

 سالمونلا می تواند سبب گاستروانتریت جدی در انسان شود و اغلب از نمونه های مختلف مواد غذایی جدا می شود. کشت سلول، ایمنی سنجی و واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR)، روش های فعلی برای تشخیص چنین عوامل بیماری زایی هستند. با این حال، این روش ها وقت گیر و پر زحمت هستند و بنابراین قادر به پایش سریع سالمونلا نمی باشند.

این مطالعه با هدف طراحی یک IC-LAMP جهت تشخیص سریع و حساس سالمونلا انجام شد.

از سالمونلا به عنوان آنتی ژن برای تولید آنتی بادی تک دودمانی (mAb) استفاده شد و mAb ها از طریق 3 بار زیرکلون سازی تهیه شدند. آنتی بادی تک دودمانی 1B12 با میل ترکیبی بالا در سطح بیدهای مغناطیسی-ایمنی (IMBs) جهت ربایش سالمونلا پوشش داده شدند. فراورده حاصل (سالمونلاIMBs-) با استفاده از پرایمرهای اختصاصی که ژن محافظت شده invA را در سالمونلا هدف قرار می دهند، برای LAMP استفاده شد.

سنجش IC-LAMP بر اساس آنتی بادی تک دودمانی 1B12 و LAMP طراحی و ایجاد شد. با هدف قرار دادن ژن حفاظت شده invA در سالمونلا، مدت زمان شناسایی از 3 روز به 50 دقیقه کاهش یافت. اگر واکنش حاوی سالمونلا باشد، رنگ فلوئورسنت سبز و نوار ذوزنقه ای به وضوح مشاهده می شود. نکته مهم این است که این روش، ویژگی آنتی بادی و LAMP را با حد تشخیص CFU/ml 5 در آب و شیر آلوده شده به صورت دستی، ترکیب می کند. ویژگی این روش با سنجش سایر باکتری های مشابه نشان داده شد. نتایج نشان می دهد که IC-LAMP فقط با سالمونلا واکنش می دهد و واکنش متقاطع با سایر باکتری های مشابه ندارد.

نتیجه گیری:

 سنجش IC-LAMP طراحی شده در این مطالعه یک روش سریع، حساس و تک مرحله ای دیداری جهت غربال حضور سالمونلا در نمونه های مواد غذایی است. این روش نسبت به روش های مرسومPCR ، LAMP و دیگر روش ها، سریع تر بوده و می تواند به عنوان یک روش غربالگری اولیه برای تشخیص استفاده شود.