تولید آزمایشگاهی فرم فعال ایمونوتوکسین هدف گذاری شده برعلیه گیرنده فاکتور محرک رشد کلونی گرانولوسیت

هدف از مطالعه ی حاضر، تولید پروتئین نوترکیب هیبریدی DT389GCSF به فرم فعال محلول در باکتری E. coli Bl-21(DE3) ، تخلیص و ارزیابی سمیت سلولی آن می باشد.

پروتئین DT389GCSF، با دنباله ی 6 هیستیدین در باکتری E. coli BL-21(DE3)  در دمای 28 درجه سانتیگراد به ‏فرم محلول بیان شد. سپس از طریق ستون کروماتوگرافی تمایلی نیکل سفاروز تخلیص شد. در نهایت عملکرد پروتئین نوترکیب خالص شده با استفاده از آزمون  TTM  بر روی سلول سرطانی 06-LH مورد ارزیابی قرار گرفت.

میزان بیان و خلوص پروتئین DT389GCSF با استفاده از نرم افزار Image J، به ‏ترتیب در حدود 12 و 80 درصد تخمین زده شد. میزان IC50 پس از 48 ساعت قرارگیری پروتئین DT389GCSF در معرض رده ی سلولی، در حدود 000019/0±00017/0 مولار بود.

با کاهش دما و استفاده از مکانیسم درون سلولی، می توان بازتاخوردگی پروتئین هیبریدی DT389GCSF را به‏ شکل مناسب و به ‏فرم فعال مشاهده نمود. در نتیجه در مراحل تولید آزمایشگاهی ایمونوتوکسین‏های مربوطه می‏توان با استفاده از این روش، از مراحل تولید به ‏صورت اینکلوژن بادی صرف‏نظر کرد.