ایمونوژنیسیتی نوکلئوپروتئین ویروس آنفلوانزای طیور

ویروس آنفلوانزا، بیماری عفونی جدی آنفلوانزای مرغی (طیور) را ایجاد می کند که این ویروس متعلق به خانواده ارتومیکیسوویریده نوع A است. سنتز RNA ویروسی A با توجه به میان کنش نوکلیوپروتئین (NP) با پلیمراز ویروسی صورت می گیرد. در مطالعه حاضر، ایمنوژنسیتی نوکلیوپروتئین ویروس آنفلوانزای مرغی بررسی شد.

نمونه ویروسی آنفلوانزی مرغی سویه N2H9 A/Chicken/Iran/259/2014/ انتخاب گردید. به منظور انجام الکتروفورز و خالص سازی نوکلیوپروتئین، غلظت پروتئین نمونه ها مشخص شد. الکتروفورز SDS-PAGE و Native-PAGE بر روی ژل پلی آکریل آمید انجام گرفت و تفاوت بین باند ژل در دو روش ارزیابی شد. خالص سازی نوکلیوپروتئین ویروس با روش الکتروالوشن صورت گرفت و نوکلیوپروتئین خالص شده با استفاده از روش الایزا برای به دست آوردن تیترهای آنتی بادی تولیدشده ارزیابی گردید. برای تایید نهایی از آزمون اوچترلونی و وسترن بلات استفاده شد.

یافته ها:

 با تعیین وزن مولکولی هر یک از پلی پپتیدها ، وزن مولکولی پروتئین های H9N2 بین 30 تا 140 کیلو دالتون و وزن مولکولی نوکلیوپروتئین 60 کیلو دالتون بود. نوکلوپروتئین با روش الکتروالوشن خالص شد. اوچترلونی نشان داد که در رقت های سرم خام، 1:4 و 1:2، خطوط رسوبی بین سرم و آنتی ژن NP ایجاد شده است. NP-الایزا تشخیص سرولوژی سریع را در رقت 1:20 امکان پذیر کرد. در نهایت، با آزمون وسترن بلات، باند 60 کیلو دالتونی نوکلیوپروتئین تایید شد.

نتیجه گیری: 

نوکلیوپروتئین خالص شده با روش الکترولوشن  قابلیت تحریک سیستم ایمنی را دارد که می توان از آن جهت ساخت کیت های تشخیصی استفاده نمود.