بررسی و مقایسه روش های مبتنی بر رسوب دهی و کروماتوگرافی تمایلی در تخلیص پروتئین نوترکیب استرپتوکیناز

تخلیص پروتئین با بازده و خلوص بالا چالشی جدی در تهیه پروتئین های نوترکیب دارویی است. از بین استراتژی های تخلیص پروتئین هدف، روش های تخلیص بر پایه کروماتوگرافی تمایلی مانند Ni-NTA بسیار پرکاربرد و در عین حال هزینه بر هستند. روش های تخلیص مستقل از ستون، مانند استفاده از پروتئین های شبیه به الاستین (ELP)، به عنوان روش های جایگزین در حال توسعه هستند. در این تحقیق، کارایی استفاده از رزین نیکل، ELP و ترکیب آنها (ELP/Ni-NTA) در تخلیص پروتئین استرپتوکیناز مورد ارزیابی قرار گرفت.

ژن استرپتوکیناز توسط PCR تکثیر، در پلازمیدpET21 کلون و به سلولE.coli-Rosetta  ترانسفرم شد. پروتئین آن بیان و تخلیص شد سپس ماهیت و خلوص پروتئین به ترتیب توسط وسترن بلات و SDS-PAGE مورد ارزیابی قرار گرفت. بازده خالص سازی در هریک از روش های تخلیص با میکروبرادفورد محاسبه شد. 

بازده خالص سازی ELP-SK-His با استفاده از ستون Ni-NTA به مقدار µg/ml 14±108 و ELP به مقدار µg/ml 16±76و ELP/Ni-NTA به مقدار µg/ml 11±88 محاسبه شد. نتایج رنگ آمیزی و وسترن بلات نشان داد که کیفیت خلوص پروتئین خالص شده با ELP/Ni-NTA بیشر از روش ELP و Ni-NTA به تنهایی بود.

مطالعه حاضر نشان داد که ادغام روش های خالص سازی در یک مرحله می تواند باعث افزایش خلوص و بازده محصول نهایی در تولید پروتئین های نوترکیب دارویی شود.