اثرحذف ژن موثر در بروز سرطان UCA1 با تکنیک نوین ویرایش ژنی CRISPR/Cas9 در رده سلولی سرطان تخمدان

lncRNAها در رشد سلول، رونویسی، ترجمه و آپوپتوز نقش دارند. UCA1 نوعی lncRNA مهم است که با پیشرفت سرطان تخمدان ارتباط دارد. بیش از نیمی از زنان مبتلا به سرطان تخمدان در کمتر از پنج سال بعد از تشخیص، از بین می روند. هدف از این تحقیق حذف ژن UCA1 با استفاده از تکنیک پیشرفته CRISPR /Cas9 در سلول SK-OV-3 و تعیین اثر آن بر پیشرفت سرطان و آپوپتوز است. 

ابتدا با نرم افزار CHOPCHOP، دو نوع sgRNA برای UCA1 طراحی گردید. این sgRNAها پس از سنتز، در دو وکتور pSCas9 به صورت جداگانه کلون شدند. سلول های SK-OV-3، با دو وکتور حامل sgRNAها، ترانسفکت شدند. پس از تایید عملکرد صحیح CRISPR در این سلول ها، بیان ژن های P53 ، BAK, BAX و FAS  و آنتی آپوپتوزی BCL2 و survivin به روش real time PCR ارزیابی گردید. همچنین میزان تکثیر سلولی و آپوپتوز با MTT و فلوسیتومتری بررسی شد.

نتایج نشان دهنده حذف موفق ژن UCA1 در رده سلولی SK-OV-3 بود. بیان ژن های P53، BAK, BAX و FAS در سلول های دستورزی شده نسبت به سلول های شاهد، به صورت معنی داری افزایش بیان نشان داد (05/0>p). همچنین، کاهش بیان ژن های BCL2 و survivin در سلول های دچار حذف ژن نسبت به گروه شاهد، دیده شد (05/0>p). نتایج MTT و فلوسیتومتری موید کاهش تکثیر سلولی و افزایش آپوپتوز بود. 

حذف ژن UCA1 در سلول SK-OV-3، اثرات مثبت در کاهش تکثیر و افزایش آپوپتوز نشان داد، لذا جلوگیری از بیان ژن UCA1، نقش موثر در کنترل رشد سلول های سرطان تخمدان دارد.