ویرایش ژن LINC00511 با تکنیک نوین CRISPR/Cas9 و بررسی اثرات آن بر رده سلولی سرطان ریه

سرطان ریه، دومین سرطان شایع در جهان است. رده سلولی COR-L105 به عنوان یکی از معروف ترین رده های سلولی سرطان ریه در تحقیقات مختلف مورد استفاده قرار می گیرد. RNA های غیر کدکننده بلند (lncRNAs)، دسته ای از فاکتورهای مهم سلولی هستند که در فرآیندهایی نظیر رشد، تمایز، تکثیر، رونویسی، ترجمه و غیره نقش اساسی ایفا می کنند. نوعی lncRNA به نام LINC00511، یک تنظیم کننده رونویسی است و افزایش بیان آن در سرطان های مختلف گزارش شده است. هدف از این تحقیق حذف ژن LINC00511 با استفاده از تکنیک پیشرفته CRISPR/Cas9 در سلول های COR-L105 و بررسی اثرات آن بر پیشرفت سرطان و آپوپتوز است.

در این تحقیق تجربی، دو نوع sgRNA برای ژن LINC00511 طراحی و در دو وکتور کریسپری به صورت جداگانه کلون شدند. با استفاده از لیپوفکتامین، دو وکتور حامل sgRNA ها به سلول های COR-L105 منتقل شدند. پس از تایید حذف ژن LINC00511 از سلول های هدف، میزان تغییرات در تکثیر سلولی و آپوپتوز با روش های MTT و فلوسیتومتری سنجیده شد. علاوه بر آن، بیان ژن های مرتبط با آپوپتوز و تومورزایی به روش real time PCR مورد بررسی قرار گرفت.

حذف ژن LINC00511 در اثر کریسپر، از ژنوم رده سلولی COR-L105 انجام شد. بیان ژن های BCL2، survivin، EZH2، c-MYC و MAX در سلول های تحت تیمار (ویرایش شده) نسبت به سلول های گروه کنترل به صورت معنی داری کاهش یافت (0/05>p). افزایش بیان ژن های p21 و p57 نیز در سلول های ویرایش شده دیده شد (0/05>p). کاهش تکثیر سلولی و افزایش میزان آپوپتوز در سلول های دست ورزی شده مشاهده شد.

تخریب ژن LINC00511 در سلول های رده سرطان ریه سبب بروز آپوپتوز و کاهش تکثیر سلولی گردید. بنابراین به نظر می رسد، جلوگیری از بیان ژن LINC00511 در سلول های سرطانی، سبب کنترل تکثیر آنها می شود.