بررسی اثر سمیت سلولی و آپوپتوزی لیگوستیلید (Z-Ligustilide) بر سلول های سرطان پستان MCF-7 و سلول های طبیعی فیبروبلاست انسانی HDF1BOM با استفاده از آزمون های MTT و Annexin

سرطان پستان به منزله ی یکی از شایع ترین انواع سرطان و دومین علت شایع مرگ ناشی از سرطان در زنان است. در مطالعه حاضر، اثر لیگوستیلید (ماده موثر کلوس) بر روی رده ی سلول های سرطان پستان MCF-7 در مقایسه با رده ی سلول های طبیعی فیبروبلاست انسانی HDF1BOM مورد بررسی و ارزیابی قرار گرفت.

سلول های رده ی MCF-7 و HDF1BOM پس از کشت، با غلظت های مختلف لیگوستیلید (Z)-3-butylidene-4,5-dihydrophthalide (Z-Ligustilide) (0، 50، 100، 150 و 200 میلی گرم/ میلی لیتر) به مدت 48 و 72 ساعت تیمار شدند. سپس توانایی زیستی با استفاده از دستگاه الایزا ریدر با روش رنگ سنجی MTT و میزان وقوع آپوپتوز با استفاده از دستگاه فلوسیتومتری و کیت انکسین-پروپیدیوم یدید (Annexin-PI) در دو زمان بررسی گردید. تحلیل آماری با استفاده از نرم افزارهای SPSS و FlowJo و آزمون های ANOVA و Huynh-Feldt انجام شد.

یافته ها: 

نتایج آزمون MTT برای رده سلولی MCF-7 کاهش درصد توانایی زیستی در همه غلظت ها را نشان داد(در تیمار 48 ساعته؛ از 70/60% (mg/ml  50) به 6/80 % (mg/ml 200)، در تیمار 72 ساعته؛ از 61/95% (mg/ml 50) به 5/84% (mg/ml 200)). همچنین نتایج آزمون Annexin نشان داد که میزان القای آپوپتوز وابسته به زمان و غلظت نبوده و در بیشتر گروه ها افزایش یافته است. بیشترین درصد آپوپتوز در تیمار 48 ساعته؛ 98/3% (mg/ml 50) و در تیمار 72 ساعته؛ 97/4% (mg/ml 100) بود. نتایج آزمون MTT برای رده سلولی HDF1BOM کاهش درصد توانایی زیستی در هر دو زمان نسبت به گروه کنترل را نشان داد(در تیمار 48 ساعته؛ از 97/24% (mg/ml 50) به 5/97% (mg/ml 200)، در تیمار 72 ساعته؛ از 90/93% (mg/ml 50) به 5/26% (mg/ml 200)). همچنین طبق نتایج آزمون Annexin سلول هایی که در مرحله ابتدایی آپوپتوز قرار دارند درصد بیشتری را نشان می دهد(در تیمار 48 ساعته؛ 4/21% (mg/ml 150)، در تیمار 72 ساعته؛ 1/67% (mg/ml 200)). لیگوستیلید سمیت سلولی قابل توجهی را در سلول های HDF1BOM نشان نداد.

نتیجه‏ گیری: 

با توجه به اینکه لیگوستیلید از طریق القای آپوپتوز اثر مهاری بر رشد، تکثیر و تهاجم سلول های سرطانی دارد؛ به نظر می رسد آن می تواند برای کاهش تکثیر سلولی در سرطان پستان استفاده شود.