شرایط بهینه در استخراج و خالص سازی آنزیم پنی سیلیناز

  مطالعه حاضر با هدف بررسی شرایط بهینه برای استخراج و خالص سازی آنزیم پنی سیلیناز انجام شد. منبع آنزیم، با
کتری 6346Bacillus licheniformis  بدست آمده سازمان پژوهش های علمی - صنعتی ایران بود.

  باکتری  B. licheniformisدر محیطی حاوی نمک های معدنی، ترکیبات نیتروژن دار و منابع کربنی کشت داده شد. بعد از برداشت و آماده سازی سوسپانسیون باکتری، تخریب دیواره سلولی باکتری به روش تلفیقی از لیزوزیم و اولتراسونیکاسیون ضعیف جهت تهیه عصاره خام سلولی، صورت گرفت. سپس با روش کروماتوگرافی و الکتروفورز مقدار آنزیم تعیین شد. علاوه بر این، بهترین دمای رشد و بهترین زمان انکوباسیون بر اساس میزان جذب نمونه ها در طول موج 240 نانومتر، میزان فعالیت آنزیمی ، بهینه سازی شدت هوادهی، بهینه سازی زمان تولید آنزیم و pH بهینه مشخص شد.

  در هر لیتر کشت حدود 8 گرم سلول بازیابی شد. pH بهینه 6/5 تعیین گردید. ارزیابی پایداری حرارتی آنزیم در زمان های مختلف نشان داد که، آنزیم برای بیش از 1 ساعت در دمای 20 تا 45 درجه سانتی گراد پایدار است، در حالی که در 60 درجه سانتی گراد در 10 دقیقه غیرفعال می شود. همچنین بهترین زمان انکوباسیون برای باکتری 9 ساعت در دمای 30 درجه سانتی گراد است. همچنین از لحاظ شدت هوا دهی بالاترین میزان تولید آنزیم در ارلن های 250 میلی لیتری با حجم 50 میلی لیتر محیط کشت، در دورRPM 200، به دست آمد. میزان تولید آنزیم در این شرایط به unit/ml 2394 رسید، هوا دهی بیشتر باعث اثر مهار کنندگی اکسیژن و کاهش فعالیت آنزیم تولید شده، گردید.

باکتری B. licheniformis میکروارگانیسم مناسبی برای استخراج آنریم پنی سیلیناز است.