بهبود روش باززایی و انتقال ژن به گیاه زینتی بنفشه آفریقایی در شرایط کشت درون شیشه ای

بنفشه آفریقایی یک گیاه زینتی تجاری با رنگ های مختلف است. به‌منظور باززایی مستقیم، این گیاهچه، ابتدا در آزمایش اول که به‌صورت آزمایش فاکتوریل در قالب طرح به‌طور کامل تصادفی اجرا شد. اثر ریزنمونه‌های برگ، گره، دمبرگ، ریشه، گلبرگ و کاسبرگ در چهار رقم در محیط کشت‌‌ MS حاوی غلظت‌‌های مختلف هورمون‌های‌‌NAA ‌‌+‌‌BAP‌ وIBA +‌‌BAP‌ برای تولید شاخساره‌‌ بررسی شد. سپس در آزمایش دوم آستانه تحمل ریزنمونه‌‌‌‌های برگ و دمبرگ به آنتی‌‌بیوتیک‌‌های هیگرومایسین و کانامایسین با کشت در محیط کشت‌‌های انتخابی دارای غلظت‌‌های مختلف از این دو آنتی‌‌بیوتیک ارزیابی گردید. پس از مشخص شدن غلظت مناسب آنتی‌‌بیوتیک برای محیط کشت انتخابی، انتقال ژن‌‌های ‌‌AS1‌ و 4'CGT به ترتیب با استفاده از آگروباکتریوم سویه LBA4404 حاوی پلاسمید‌‌های pCAMBIA1304 وpBI121 انجام شد. از روش واکنش زنجیره‌‌ای پلی‌‌مراز برای شناسایی گیاهان تراریخته استفاده شد. نتیجه‌های آزمایش اول مشخص نمود که ریزنمونه برگ مناسب‌‌ترین ریزنمونه و محیط کشت‌‌ حاوی یک میلی‌‌گرم بر لیتر IBA و ‌‌‌‌BAP‌ در هر چهار رقم، ‌‌بهترین ترکیب بود. نتیجه‌های آزمایش دوم نشان داد که محیط M4 (‌‌به ترتیب حاوی 50 و 75 میلی‌‌گرم در لیتر کانامایسین و هیگرومایسین) به‌طور کامل از باززایی نمونه‌‌های غیرتراریخت جلوگیری می‌‌کند. در انتها گیاهان تراریخته با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ژن‌‌های مورد آزمایش انتخاب شدند.