مقایسه و بهبود روشهای استخراج DNA در شمشاد هیرکانی (Buxus hyrcana)

یکی از گونه های در معرض خطر و همیشه سبز جنگلهای هیرکانی ایران، شمشاد هیرکانی (hyrcana Buxus) میباشد. ارزیابی تنوع ژنتیکی مرحله مهمی برای حفظ این گونه میباشد. DNA با کیفیت برای بررسی با نشانگرهای مولکولی لازم بوده و بنابراین ما روش های استخراج DNA از نمونه های برگی hyrcana Buxus را مورد مقایسه قرار دادیم. کمیت و کیفیت DNA های استخراج شده با اسپکتروفتومتر و الکتروفورز مورد ارزیابی قرار گرفت. همچنین از نشانگرهای ISSR برای مقایسه کیفیت DNA برای تکثیر با PCR استفاده شد. نتایج نشان داد که کمیت، کیفیت، و کارایی PCR و تکرار پذیری در DNA های استخراج شده با روش های مختلف متفاوت بود. کیفیت DNA تعیین شده بر اساس A280/A260 در دامنه 02/1 تا 97/1 قرار گرفت. بیشترین غلظت DNA تعیین شده با روش اسپکتروفتومتری به روش استخراج Sanchez-Cota) l/ng 3/695)تعلق داشت و کمترین مقدار در روش Edward4 (l/ng 7/204) حاصل شد. در روش مقایسه شدت باند DNA استخراج شده با ladder DNA بیشترین غلظت در روش Onate2 مشاهده گردید. در میان روش های مختلف، روش های Doyle and Doyle ،Sánchez-Cota و Onate تغییریافته منجر به حصول کمیت و کیفیت خوبی از DNA استخراجی شدند که آخرین روش (Onate2 (کمیت و کیفیت خوبی از DNA استخراجی را ایجاد کرد و از لحاظ هزینه و زمان کارامدتر بود. Onate2 بهترین نتایج تکثیر با پرایمرهای ISSR را داشت.