بررسی مولکولی کوی هرپس ویروس (Koi Herpesvirus) در تلفات مزارع پرورشی ماهیان گرمابی استان خوزستان

هرپس ویروس نوع 3 (CyHV-3)، عامل اصلی بیماری واگیردار کوی هرپس ویروس (KHVD) در ماهی کپور معمولی و کوی در سرتاسر جهان است. بدین منظور از 60 قطعه ماهی کپور معمولی از مزارع تلفات دار و مزارع استان خوزستان که در چند سال اخیر تلفات گزارش کرده بودند، طی سال‌های 1400-1396، جهت ردیابی بیماری ویروس هرپس کوی به روش مولکولی نمونه برداری شد. جهت افزایش بار ویروس در بافت‌‌های آبشش و کلیه، به ازای سه ماهی، سه نمونه آبشش و سه نمونه کلیه به صورت جداگانه با یکدیگر مخلوط شدند. استخراج DNA بافت با استفاده از کیت تجاری شرکت رهازیست پادتن[1] طبق دستورالعمل کیت انجام شد. سپس آزمایش واکنش زنجیره‌‌ای پلی‌‌مراز آشیانه‌‌ای[2] با استفاده از مسترمیکس Amplicon و پرایمرهای مربوط به ژن پلی‌‌مراز انجام شد. نتایج حاصل از Nested PCR نشان داد که 3 نمونه (دو نمونه آبشش و یک نمونه بافت کلیه) از 40 نمونه مخلوط شده مورد آزمایش دارای باند 339 کیلوجفت باز بودند و به عنوان نمونه مثبت در نظر گرفته شدند. تعیین توالی محصولات PCR و آنالیز اولیه Blast نشان داد که توالی یکی از نمونه‌‌های مثبت به توالی‌‌های مربوط به CyHV-3 شباهت داشت. نتایج هم‌ترازی ردیف‌‌های نوکلیوتیدی و درخت فیلوژنی این توالی، کوی هرپس ویروس را با قطعیت تشخیص داده و با شماره دسترسی LC713276 در بانک ژن جهانی ثبت گردید.