بیان پروتئین نو ترکیب P39 بر وسلا آبورتوس در باکتری اشریشیا کلی

بروسلوز از مهم ترین بیماری های زئونوتیک است که باعث سقط جنین و نازایی در دام ها و بروز تب مواج در انسان می گردد. استفاده از واکسن رایج یعنی سویه S19 بروسلا آبورتوس عوارض متعددی برای دام ها دارد. پروتئین P39 بروسلا از جمله پروتئین های فضای پری پلاسمیک است که به عنوان یکی از شاخص های مهم ایمنی زا مطرح است. با تولید پروتئین نو ترکیب P39 می توان مطالعات بیشتری در زمینه توانایی این پروتئین در تحریک پاسخ های ایمنی زا بر علیه بروسلا انجام داد. لذا در این تحقیق تولید و تخلیص این پروتئین در باکتری اشریشیا کلی بصورت نو ترکیب انجام گرفته است.
در این تحقیق تجربی با استفاده ازواکنش زنجیره ای پلیمراز، ژن P39 از باکتری بروسلا آبورتوس تکثیر گردید. پس از تخلیص ژن P39، در ناقلین پلاسمیدی pSK+ و pGEX4T1 کلون گردید. بنابر این ساختارهای pSK+-P39 و pGEX4T1-P39 تهیه گردید. برای تولید پروتئین نوترکیب P39 ابتدا ساختار پلاسمیدی pGEX4T1-P39 وارد باکتری اشریشیا کلی سویه BL21 شد. سپس تولید پروتئین با القای پلاسمید pGEX4T1-P39 توسط IPTG صورت گرفت. پروتئین تولید شده با استفاده از کیت تخلیص پروتئین گلوتاتیون اس ترانسفرآز سفارز خالص گردید. میزان پروتئین خالص شده با استفاده از روش براد فورد اندازه گیری شد.
ترادف نوکلئوتیدی ژن تکثیر شده توسط PCR کلون شده در ناقل پلاسمیدی+pSK کاملا با ژنP39 بروسلا آبورتوس یکسان بود. تولید پروتئین P39 با القا پلاسمید pGEX4T1-P39 انجام گردید. میزان پروتئین خالص شده برابر 200 میکروگرم در میلی لیتر بدست آمد.
تولید پروتئین نو ترکیب P39 بروسلا آبورتوس که در سیتوپلاسم باکتری اشریشیا کلی ناپایدار است، با استفاده از ناقلین دارای پروتئین الحاقی نظیر pGEX4T1 در میزبان اشریشیا کلی سویه BL21 امکان پذیر است.