بیان، تخلیص و ارزیابی ایمنی زایی پروتئین کایمر دربردارنده نواحی ایمونوژن از فلاژلین و اینتیمین علیه باکتری E.coli O157:H7

اشریشیاکلی خونریزی دهنده روده ای (EHEC) و سروتیپ O157:H7 یکی از مهم ترین بیماری زاهای عامل اسهال می باشند. باکتری با تولید سم شبه شیگا باعث تخریب سلول های اپیتلیال و در موارد حاد سندرم اورمی همولیتیک (HUS) می شود. درمان آنتی بیوتیکی علیه این عامل کارآمد نبوده بلکه باعث تشدید تولید سم شیگا می شود. طراحی ایمونوژن های کایمر می تواند یکی از راه بردهای موثر علیه باکتری باشد. هدف از این تحقیق، بررسی ایمنی زایی آنتی ژن کایمر نوترکیب در بردارنده نواحی ایمونوژن از  پروتیین های فلاژلین و اینتیمین علیه باکتری E.coli O157:H7 بود.

 بخش های ایمونوژن از پروتیین های فلاژلین و اینتیمین برای ارزیابی های بیوانفورماتیک انتخاب گردید. پلاسمید نوترکیب pET28a- H7-Int به E.coli BL21 (DE3) منتقل شد. بیان پروتیین کایمر با IPTG  القا و نتایج با SDS-PAGE ارزیابی گردید. پروتیین نوترکیب با استفاده از ستون کروماتوگرافی تمایلی Ni-NTA تخلیص و با روش وسترن بلات تایید شد. ایمنی زایی در موش با پروتیین خالص انجام و تیتر آنتی بادی به روش ELISA تعیین گردید. ریزش باکتری و مرگ ومیر در موش ها مورد بررسی قرار گرفت.

 بیان پروتیین نوترکیب درمیزبان E.coli منجر به تولید پروتیین H7-Int با وزن 70 کیلودالتون شد. میزان پروتیین خالص شده برای هر لیتر از محیط 80 میلی گرم بود. ایمنی زایی موش ها با پروتیین نوترکیب، باعث القای ایمنی هومورال شد. متعاقب خوراندن باکتری زنده، ریزش باکتری در مدفوع موش های ایمن به طور معنی داری (CFU/ml 102) کاهش یافت. 100 درصد و 80 درصد از موش های ایمن به ترتیب پس از تزریقLD50 10  و LD50100 از باکتری، زنده ماندند.

 نتایج نشان داد، پروتیین کایمر ایمنی محافظتی را در موش ها ایجاد می کند و می تواند به عنوان یک کاندید ایمونوژن علیه E.coli O157:H7 مورد بررسی قرار گیرد.